目的  建立气相色谱（GC）法测定药用辅料甘油三乙酯的有关物质。

方 法  采用Rtx-1701和DB-1701色谱柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm），载气为氮气，流速为1.5 mL/ min，进样口温度为200 ℃，采用氢火焰离子化检侧器，检测器温度为250 ℃，程序升温。

结果  在该色谱条件下，各物质能有效分离，在2~40 μg/mL范围内线性关系良好（r＞0.99）。乙酸、甘油、1-单乙酸甘油酯、1,2-二乙酸甘油酯及1,3-二乙酸甘油酯回收率分别为100.7%（RSD=3.12%）、95.1%（RSD=3.66%）、99.43%（RSD=4.62%）、103.66%（RSD=5.88%）、103.15%（RSD=4.17%）（n=6）。

结论  本方法准确度高、重现性好，可用于甘油三乙酯有关物质的测定，为完善其质量标准提供依据。

甘油三乙酯又称三醋酸甘油酯，英文名为Triacetin，由甘油和醋酸酯化合成制得。作为药用辅料，在制药行业中常用作溶剂、增塑剂和保湿剂等[1]。《中国药典（2020年版）》[2]、EP11.0[3]、USP现行版[4]及BP2023[5]均收录甘油三乙酯质量标准。《中国药典（2020年版）》、EP11.0、BP2023甘油三乙酯质量标准中未设置有关物质项，而USP现行版对醋酸、甘油、1-单乙酸甘油酯、2-单乙酸甘油酯、1,2-二乙酸甘油酯、1,3-二乙酸甘油酯6个工艺相关杂质（结构式见图1）、其他单个非特定杂质和总杂量进行了控制。

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  图1 杂质结构式图

  Figure 1.Impurity structure diagram

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为了进一步完善《中国药典（2020年版）》质量标准，及了解市场上药用辅料甘油三乙酯有关物质含量情况，本研究参考USP现行版，建立了气相色谱（gas chromatography，GC）法测定药用辅料甘油三乙酯的有关物质。

1 材料

1.1 主要仪器

GC-2010气相色谱仪（日本岛津仪器有限公司）；7890A气相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；MS105DU电子天平（瑞士Mettler-Toledo公司，精度：0.10 mg）。

1.2 主要药品与试剂

甘油三乙酯（批号：R124G0，纯度≥99.3%）、1-单乙酸甘油酯（批号： 12258900，纯度99.5%）来源于USP；1,2-二乙酸甘油酯（批号：10-RAJ-188-1，纯度90%）、1,3-二乙酸甘油酯（批号：2-LXM-129-1，纯度约50%）来源于Toronto Research Chemicals；苯甲醇（批号：190019-201903，纯度≥99.9%）、乙酸（批号：190079-202002，纯度99.90%）、甘油（批号：190057-202104，纯度99.90%）来源于中国食品药品检定研究研究；其余试剂均为分析纯；水为纯化水；甘油三乙酯样品由3家不同生产企业提供，其中A企业3批，B企业3批，C企业1批。

2 方法与结果

2.1 GC色谱条件

色谱柱：Rtx-1701（30 m×0.25 mm，0.25  μm）和DB-1701（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；采用氢火焰离子化检侧器；进样口温度：200 ℃；检测器温度：250 ℃；载气为氮气；流速：1.5 mL/ min；分流比：10 ∶ 1；采用程序升温：起始温度为50 ℃，维持4  min，以30 ℃/min的速率升温至140 ℃，维持13 min，以10 ℃/min的速率升温至200 ℃，维持5 min，以30 ℃/min的速率升温至230 ℃，维持10 min。

2.2 溶液的制备

内标溶液：取苯甲醇适量，精密称定，用异丙醇溶解稀释制成0.02 mg/mL的溶液，即得。

对照品溶液：分别精密称取甘油三乙酯、甘油、乙酸、1-单乙酸甘油酯、1,2-二乙酸甘油酯、1,3-二乙酸甘油酯适量，用内标溶液稀释制成1.0  mg/mL的对照品储备液；再精密量取对照品储备液适量，用内标溶液配制成2，5，10，20，30，40 μg/mL系列混合对照品溶液。

供试品溶液：精密称取本品1.0 g，置50 mL量瓶中，用内标溶液溶解并稀释至刻度，即得。

对照溶液：精密量取供试品溶液1.0 mL，置100 mL量瓶中，加内标溶液稀释至刻度，即得。

2.3 系统适用性试验

精密量取内标溶液、对照品溶液及供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，记录色谱图。结果空白无干扰，各杂质峰能有效分离，具体见图2。

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  图2 典型GC色谱图

  Figure 2.Typical GC chromatogram

  注：1.内标；2.乙酸；3.甘油；4.1-单乙酸甘油酯；5.1,3-二乙酸甘油酯；6.1,2-二乙酸甘油酯；7.甘油三乙酯。

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2.4 专属性试验

分别取样品1.0 g，进行酸（1 moL/L盐酸溶液1mL，室温1 h）、碱（1 moL/L氢氧化钠溶液1 mL，室温2 h）、氧化（30%过氧化氢1 mL，室温过夜）、高温（80 ℃过夜）、光照（4 500 lx过夜）破坏试验后，按“2.2”项下方法处理。结果表明，经酸、碱、氧化、高温、光照破坏条件破坏后，降解产物能与主峰完全分离，符合要求，具体见图3。

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  图3 专属性试验GC色谱图

  Figure 3.GC chromatogram of specificity test

  注：1.内标；7.甘油三乙酯。

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2.5 线性关系、检测限与定量限试验

取“2.2”项下系列混合对照品溶液各1 μL，注入气相色谱仪，以浓度为横坐标（X，μg/ mL），各物质峰面积与内标峰面积比值为纵坐标（Y）绘制标准曲线。结果显示，各物质在浓度2~40 μg/mL范围内与峰面积比呈良好的线性关系。精密量取混合对照品溶液适量，逐级稀释，设定量限信噪比为10，检测限信噪比为3。结果见表1。

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  表格1 线性关系、检测限与定量限测定结果

  Table 1.The results of standard curve, detection limit and quantification limit

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2.6 精密度试验

取“2.2”项下混合对照品溶液（30 μg/mL）连续进样6次。结果显示，各物质峰面积的RSD均小于1.8%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.7 重复性试验

取本品（批号：73603）1.0 g，平行制备6份供试品溶液，依法测定。结果显示，样品中乙酸、甘油、1,3-二乙酸甘油酯、1,2-二乙酸甘油酯的平均含量为0.002%，0.003%，0.03%和0.02%，RSD分别为12.35%，7.75%，3.53%和6.74%（n=6），未检出1-单乙酸甘油酯。

2.8 稳定性试验

取混合对照品溶液（30 μg/mL），分别在0，2，4，6，12，24 h进样测定。结果显示，各物质峰面积的RSD均小于2.86%（n=6），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.9 回收率试验

取本品（批号：73603）1.0 g，精密加入混合对照品溶液（乙酸0.98 mg/mL、甘油1.00 mg/mL、1-单乙酸甘油酯0.99 mg/mL、1,2-二乙酸甘油酯：0.9 mg/mL、1,3-二乙酸甘油酯1.02 mg/ mL）1.0 mL，平行制备6份供试品溶液，依法测定并计算回收率。结果显示，乙酸、甘油、1-单乙酸甘油酯、1,2-二乙酸甘油酯、1,3-二乙酸甘油酯的回收率分别为100.7%（RSD=3.12%）、95.1%（RSD=3.66%）、99.43%（RSD=4.62%）、103.66%（RSD=5.88%）、103.15%（RSD=4.17%）（n=6）。

2.10 耐用性试验

采用不同品牌气相仪、不同品牌色谱柱测定样品（批号：73603）。结果样品中有关物质含量测定无明显差异，各物质均可较好地分离，表明方法的耐用性良好，结果见表2。

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  表格2 耐用性试验结果

  Table 2.The results of durability test

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2.11 样品测定

取7批甘油三乙酯样品，依法测定，采用主成分自身对照法计算含量，结果见表3。

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  表格3 样品测定结果 (%, n=3)

  Table 3.The results of sample determination (%, n=3)

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3 讨论

3.1 分流比调整

USP现行版有关物质中采用气相法测定有关物质，以氢气为载气，流速1.5 mL/min，分流比40 ∶ 1。国内气相色谱仪常以氮气为载气[6-8]，另发现按照USP现行版设置分流比为40 ∶ 1时，仪器灵敏度很低，无法满足试验要求。故本次研究采用氮气作为载气，分流比调整为10 ∶ 1。

3.2 升温程序调整

按照USP现行版有关物质升温程序考察样品，结果发现样品进样20 min后，升温坡度出现多个杂质峰（图4-A）。将升温速率由30 ℃/min调整为10 ℃/min后，发现相对保留时间32.139  min处出现新的杂质峰（图4-B）。故采用优化后的升温程序，洗脱出全部杂质。

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  图4 升温程序调整的典型GC色谱图

  Figure 4.Typical GC chromatogram for adjusting the heating program

  注：A.USP现行版方法；B.升温程序调整后。

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3.3 计算方式、限度的拟定

USP现行版采用加校正因子的自身对照法计算乙酸、甘油、1-单乙酸甘油酯、2-单乙酸甘油酯、1,2-二乙酸甘油酯、1,3-二乙酸甘油酯6个工艺相关杂质，并规定6个杂质均不得过0.1%，其他单个杂质不得过0.1%，杂质总量不得过0.2%。

本次研究结果显示，乙酸、甘油、1-单乙酸甘油酯、1,2二乙酸甘油酯等4个杂质的校正因子均≤1，与USP现行版标准中的规定有一定差异，这可能是对照品纯度或仪器参数差异导致；且征集的7批样品中乙酸、甘油、1-单乙酸甘油酯、1,2二乙酸甘油酯含量低。查阅文献，乙酸、甘油等6个特定杂质[9]毒性均较低，结合安全性和校正因子综合分析，建议在质量标准中不对上述6个杂质进行单独控制，仅对单个非特定杂质和总杂质进行控制，采用不加校正因子的自身对照法进行计算[10-12]。杂质限度建议参照USP现行版拟定，即单个杂质不得过0.1%，总杂质不得过0.2%。

3.4 小结

本研究建立的GC法准确高、重复性好，为完善药用辅料甘油三乙酯质量标准提供依据。样品测定结果显示，7批样品中，1批样品单个杂质超出了拟定限度（不得过0.1%），2批样品总杂质超出了拟定限度（不得过0.2%），应加强质量监管。

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