目的  优化维药罗勒子总多酚的超声辅助提取工艺，并系统评价其体外抗氧化活性，为该传统维药资源的高值化利用提供试验依据。

方法  以罗勒子为原料，采用单因素试验结合正交试验设计，考察乙醇浓度、料液比及超声时间对总多酚得率的影响；采用DPPH与ABTS自由基清除体系，对不同提取条件下的总多酚样品进行抗氧化活性检测。

结果  确定最优提取工艺为乙醇浓度60%、提取时间50 min、料液比1 ∶ 60（g/mL），此条件下总多酚提取量可达8.383 1 mg/g；所有单因素试验样品对DPPH自由基平均清除率为77.42%，对ABTS自由基平均清除率为93.31%，整体表现出稳定且优异的天然抗氧化活性。

结论  优化后的超声辅助提取工艺操作简便、效率稳定，可显著提升总多酚得率并有效保留其生物活性；维药罗勒子总多酚具备开发为天然抗氧化剂、功能性食品原料或医药辅料的潜力，为该传统维药的现代化开发提供技术支撑。。

罗勒子为唇形科植物罗勒（Ocimum basilicum L.）的干燥果实，系维吾尔医临床习用药材，拥有超过数百年的药用历史。其药用价值最早见于《注医典》《药物之园》及《白色宫殿》等维吾尔医古籍文献。在现代药材标准体系中，该药材也被纳入《维吾尔药材标准》上册（1993年版）及《卫生部药品标准维吾尔药分册》[1]。临床可用于治疗各类心脏病、心悸、痔疮出血、久泻等病症，亦可缓解感冒头痛、胸闷、妇女闭经或月经不调及暑天所致胃肠胀气等不适[2]。罗勒子的化学成分复杂且种类丰富，主要包含挥发油[3-4]、多酚及其苷类[5-6]、香豆素类[7]、多糖[8-9]、脂肪酸类、三萜类、皂苷类及生物碱等多种成分。Sharma等[10]通过气相色谱-质谱联用技术对罗勒子提取物进行分析，共鉴定出19种化合物，且罗勒子中的多酚类物质以芦丁和迷迭香酸为主。现代药理研究表明，罗勒子油具有抗肿瘤、降血糖、降血压、延长凝血时间及睡眠时间等药理活性[2, 11]。此外，罗勒子在抗炎、抗糖尿病、抗氧化、抗菌及抗癌方面亦表现优异[12]。

多酚类物质是含有多个酚羟基的一类化合物，此类结构特征使其具备显著的抗氧化、抗炎、抗肿瘤等生物活性，基于此，多酚类物质已被广泛应用于保健食品的研发与生产领域[13-15]。在临床应用的中药单体与复方中，发挥抗炎效应的成分以黄酮、酚酸等多酚类化合物为主。中药多酚类成分可作用于抗炎相关的不同环节，通过抑制相关信号传递、减少炎症介质生成、增强机体免疫力等多重途径，实现对炎症反应的缓解[16]。多酚化合物的邻位酚基具有较强的氧化特性，可通过捕获自由基、消耗氧气发挥自由基清除作用，同时能激活抗氧化活性酶系、螯合参与氧化过程的过渡金属离子，从而实现抗氧化效应，减轻氧化反应引发的机体损伤[17-18]。在抗炎层面，多酚类物质可通过上调抗炎因子、下调促炎因子及调控相关信号通路发挥抗炎作用，进而对炎症性疾病形成预防效果[19]。

本文以维药罗勒子为研究载体，聚焦其核心活性成分总多酚，采用“单因素试验筛选关键提取参数，DPPH与ABTS自由基清除体系量化评价体外抗氧化活性”的研究思路，系统开展罗勒子总多酚提取工艺优化及抗氧化性能研究。旨在为这一维吾尔医传统常用药材中多酚类活性成分的高效富集提供科学技术支撑，并为其后续开发天然抗氧化剂、功能性食品原料、医药辅料等高值化产品筑牢试验基础，进而推动维药传统资源的现代化挖掘与创新性利用。

1 仪器与材料

1.1 主要仪器

PX423ZH/E型电子天平（上海奥豪斯科技有限公司）；DFY-500克型摇摆式高速中药粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；Evolution One系列紫外分光光度计（美国赛默飞世尔科技有限公司）；AS10200BT型超声波清洗机（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）。

1.2 主要药品与试剂

罗勒子（河北嘉恒冷背药业有限公司，产地：江苏，批号：C202401002），经高级实验师郝娟检验符合《河北省中药饮片炮制规范（2024年版）》[20]；没食子酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110831，纯度91.5%）；福林酚试剂（生物技术级，上海麦克林生化科技股份有限公司，批号：F6366）；PBS缓冲液（武汉赛维尔生物科技有限公司，批号：G2156）；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH，上海麦克林生化科技股份有限公司，批号：C17888258）；2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS，毕得医药科技股份有限公司，批号：GMX762）；其余试剂均为分析纯；水为蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 罗勒子脱脂

准确称取150 g罗勒子药材粉末，置于500 mL烧杯中，加入300 mL石油醚，充分摇匀后室温静置浸泡过夜；浸泡完成后进行抽滤处理，收集滤渣并自然晾干，随后将晾干的滤渣置于研钵中研磨至无明显颗粒状，密封备用。

2.2 罗勒子总多酚的含量测定

精密称取没食子酸对照品0.010 20 g，置于10  mL量瓶内，加蒸馏水溶解并定容至刻度，摇匀后避光保存，作为标准储备液。精密吸取上述标准储备液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分别置于10 mL棕色量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，配成不同浓度的标准系列溶液。精密吸取各浓度的标准溶液1.0 mL，置于10 mL 避光比色管内，依次加1.0 mL蒸馏水、0.5 mL 50%福林酚试剂，摇匀后再加入1.5 mL 17.5%碳酸钠溶液，补加蒸馏水定容至刻度，充分混匀后避光静置1.5 h。以不含没食子酸的试剂空白为参比，采用紫外分光光度计于760 nm波长处测定各溶液的吸光度（A）。以没食子酸标准溶液浓度（C，μg/mL）为横坐标、对应A值为纵坐标进行线性回归分析，并绘制标准曲线。得到线性回归方程：A=0.008  6C+0.017 9（r=0.998 5），结果表明没食子酸在0~112.0 μg/mL范围内线性关系良好。

罗勒子总多酚含量测定参考耿晓桐等[21]的方法并稍作调整。精密称取罗勒子脱脂粉末2.0  g，置于具塞锥形瓶中，在超声功率300 W的条件下进行超声提取，提取完成后采用抽滤法分离固液，收集提取液备用。每个样品平行试验重复3 次，分别收集提取液备用。精密量取上述提取液0.15  mL，置于1.5 mL EP管中，加水定容至刻度，得到10倍稀释液。精密吸取该稀释液1.0 mL，置于10 mL比色管中，依次加入1.0 mL超纯水、0.5  mL 50%福林酚试剂和1.5 mL 17.5%碳酸钠溶液，摇匀后加水定容至10 mL。充分混匀后避光静置1.5 h，以试剂空白为参比，于760 nm波长处测定A值。每个平行样品均按上述步骤单独测定，平行测定3次。根据没食子酸标准曲线计算总多酚浓度，并进一步换算总多酚得率。总多酚含量计算公式如下：

总多酚含量（mg/g）=（C×V×N）/（M×1 000）

式中：C为根据标准曲线求得的总多酚浓度（μg/mL）；V为提取液的取样体积（mL）；N 为罗勒子提取液的总稀释倍数；M为罗勒子脱脂粉末的称样量（g）。

2.3 DPPH自由基清除率的测定

DPPH自由基清除率的测定严格参照《GB/T 39100-2020多肽抗氧化性测定DPPH和ABTS法》 [22]中的相关规定进行，并根据试验实际条件稍作调整。采用乙醇体系显色法测定DPPH自由基清除率：取2.0 mL 0.1 mmol/L DPPH乙醇溶液置于5 mL离心管中，加入2.0 mL无水乙醇，混匀后于室温避光条件下反应30 min，于517 nm波长处测定A值，记为空白对照A 值（A₀）。此操作平行重复3次，取平均值作为最终A₀值。

分别吸取2 mL不同提取条件的罗勒子多酚提取液置于5 mL离心管中，加入2.0 mL 0.1  mmol/ L DPPH乙醇溶液，于517 nm波长处测定A值，记为样品A值（A₁）；另取2.0 mL无水乙醇替代DPPH溶液，加入2 mL样品提取液，同法测定517 nm波长处A值，记为样品本底A值（A₂）。DPPH自由基清除率按以下公式计算：

清除率（%）=[A₀-（A₁-A₂）]/A₀×100%

2.4 ABTS自由基清除率的测定

ABTS自由基清除率的测定也严格参照《GB/T 39100-2020多肽抗氧化性测定DPPH和ABTS法》[22]中的相关规定进行，并根据试验实际条件稍作调整。取7.4 mmol/L ABTS储备液与2.6 mmol/L过硫酸钾储备液按1 ∶ 1体积比混合，室温避光静置12~16 h，生成ABTS自由基阳离子母液。取该母液用PBS稀释50倍，调节734 nm波长下A值至0.70±0.02，作为ABTS工作液。

精密吸取0.2 mL无水乙醇，加入3.8 mL ABTS工作液，混匀后室温避光反应6 min，于734 nm波长处测定A值，记为A₀。此操作平行重复3次，取平均值作为最终A₀值。

精密吸取0.2 mL不同提取条件的罗勒子多酚提取液，加入3.8 mL ABTS工作液，混匀后室温避光反应6 min，于734 nm波长处测定A值，记为A₁。以0.2 mL无水乙醇替代样品，于734 nm波长处测定A值，记为A₂，依据“2.3”项下公式计算ABTS自由基清除率。

2.5 统计学分析

试验数据均采用GraphPad Prism 9.5中文版软件进行统计学处理，每组3次平行试验结果以平均值表示，针对正交试验数据开展极差分析与方差分析，用以判断各考察因素对罗勒子总多酚提取量的影响程度，筛选最优工艺组合，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2.6 单因素试验

采用控制变量法开展单因素试验，分别考察乙醇浓度（30%~80%）、超声时间（20~90 min，梯度10 min）、料液比（1 ∶ 10~1 ∶ 70，g/mL）对罗勒子总多酚得率、DPPH自由基清除率及ABTS自由基清除率的影响。在考察某一因素时，其余因素固定为：乙醇浓度60%、料液比1 ∶  40、超声时间60 min。每组试验平行操作3次。

2.6.1 乙醇浓度对罗勒子总多酚得率、DPPH自由基清除率及ABTS自由基清除率的影响

乙醇浓度作为影响植物多酚提取的关键因素之一，其对罗勒子总多酚得率及DPPH、ABTS自由基清除率的影响结果如图1所示。当乙醇浓度为30%时，总多酚得率为（5.020 9±1.035）mg/g；随着浓度升高，得率持续增加，至60%时达到最大值（8.448 8±0.240 9）mg/g，最小值与最大值之间差异有统计学意义（P＜0.01）。当乙醇浓度进一步升高至70%和80%时，得率分别降至（7.051 2±0.338 1）mg/g和（7.881 4±0.261 2）mg/g。在30%~80%乙醇浓度范围内，罗勒子提取物的DPPH自由基清除率维持在75%~85%，ABTS自由基清除率均高于90%，两种自由基清除率在各乙醇浓度组间差异均无统计学意义（P＞0.05）。结果表明，该浓度区间内乙醇浓度对罗勒子提取物的抗氧化活性影响较小，提取物对ABTS自由基的清除能力整体优于DPPH自由基。综上，60%乙醇浓度为罗勒子总多酚超声提取的最优选择，故后续正交试验以此浓度为中心进行设计。

• 
  图1 乙醇浓度的影响（n=3）

  Figure 1.Effect of ethanol concentration (n=3)

  注：A. 罗勒子总多酚得率；B. DPPH自由基清除率；C. ABTS自由基清除率；aP﹤0.01。

  

2.6.2 超声时间对罗勒子总多酚得率的影响

超声时间通过调控细胞破碎效率与多酚稳定性，对罗勒子总多酚得率及DPPH、ABTS自由基清除率的影响结果如图2所示。在20~90 min的超声时间范围内总多酚得率呈现先上升后下降的变化趋势。超声时间为20 min时，得率为（8.151 2±0.307 8）mg/g；随着时间延长，得率逐步升高，至50 min时达到峰值（8.611 6±0.421 7）mg/g。时间延长至60 min时，得率快速降至（8.009 3±0.302 1）mg/g；在60~90 min区间内，得率维持在（8.009 3±0.302 1）mg/g 至（8.137 2±0.329 6）mg/g区间小幅波动，但均未回升至峰值水平。在20~90 min的超声时间范围内，罗勒子提取物的DPPH自由基清除率稳定在70%~80%区间，ABTS自由基清除率均保持在90%以上的高水平，各超声时间组间两种自由基清除率差异均无统计学意义（P＞0.05）。结果表明，在该考察时间范围内，超声时间对罗勒子提取物的抗氧化活性无显著影响，且提取物对 ABTS自由基的清除能力整体强于 DPPH自由基。综上，50 min为罗勒子总多酚超声提取的最优时间，故后续正交试验以此超声提取时间为中心进行设计。

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  图2 超声时间的影响（n=3）

  Figure 2.Effect of ultrasonication time (n=3)

  注：A. 罗勒子总多酚得率；B. DPPH自由基清除率；C. ABTS自由基清除率。

  

2.6.3 料液比对罗勒子总多酚得率的影响

料液比对罗勒子总多酚得率及DPPH、ABTS自由基清除率的影响结果如图3所示。当料液比从1 ∶ 10提升至1 ∶ 50时，总多酚得率呈持续上升趋势，由（6.861±0.254 7）mg/ g升至峰值（8.860 5±0.329 1）mg/g，二者比较差异有统计学意义（P＜0.01）。当料液比继续增大至1 ∶ 70时，得率逐步回落至（7.520 9± 0.290 0）mg/g。在1 ∶  10~1 ∶ 70的料液比范围内，罗勒子提取物的DPPH自由基清除率整体维持在70%~85%，ABTS自由基清除率均稳定在90%以上的高水平，各料液比组间两种自由基清除率差异均无统计学意义（P＞0.05）。结果表明，该考察范围内料液比对罗勒子提取物的抗氧化活性影响较小，且提取物对ABTS自由基的清除能力整体优于DPPH自由基。综上，料液比1 ∶ 50为罗勒子总多酚提取的最优参数，故后续正交试验以此料液比为中心进行设计。

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  图3 料液比的影响（n=3）

  Figure 3.Effect of solid-liquid ratio (n=3)

  注：A. 罗勒子总多酚得率；B. DPPH自由基清除率；C. ABTS自由基清除率，aP﹤0.01。

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2.7 正交试验

以单因素试验结果为依据，针对乙醇浓度、超声提取时间、料液比这3个核心考察因素，在各因素对应含量变化的拐点区间附近分别选取3个水平，开展三因素三水平正交试验设计。各组试验均设置至少3次平行重复，测定后取平均值用于后续分析，正交试验设计及结果分别见表1和表2。

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  表格1 正交试验设计

  Table 1.The design of orthogonal experiment

  

由表2可知，乙醇浓度对罗勒子总多酚提取量影响最大，料液比次之，提取时间影响较小，可适度延长提取时间以提升提取量。正交试验确定最优工艺为A₂B₂C₃，即乙醇浓度60%、提取时间50 min、料液比1 ∶ 60（g/mL），此条件下提取量为8.383 1 mg/g。

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  表格2 正交试验结果

  Table 2.The result of orthogonal experiment

  

为进一步验证各考察因素对罗勒子总多酚得率影响的统计学显著性，对正交试验结果进行方差分析，结果见表3。方差分析表明，乙醇浓度和料液比是影响罗勒子总多酚超声提取的关键因素（P＜0.05），提取时间对其的影响无统计学意义（P＞0.05）。

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  表格3 正交试验方差分析

  Table 3.Analysis of variance for orthogonal experiment

  注：F0.05（2,2）=19.00。

  

3 讨论

本研究结合单因素与正交试验优化罗勒子总多酚超声提取工艺，确定最优条件为乙醇浓度60%、提取时间50 min、料液比1 ∶ 60（g/mL），此工艺下总多酚提取量可达8.383 1 mg/g。

罗勒子多酚以羟基酪醇、迷迭香酸、咖啡酸等为主要活性成分，其酚羟基结构是清除自由基的核心基础。羟基酪醇、迷迭香酸等酚类化合物中的酚羟基可作为氢供体，与DPPH、ABTS等自由基发生反应，通过转移氢原子终止自由基链式反应，从而发挥抗氧化作用，这与现有研究中天然多酚类物质的抗氧化机制一致。其中，迷迭香酸作为罗勒子多酚的主要活性组分，其分子结构中含有的邻二酚羟基的还原性更强，对自由基的清除能力更突出，这也为罗勒子总多酚良好的抗氧化活性提供了物质基础。对所有单因素试验样品的抗氧化活性检测显示，样品对DPPH自由基平均清除率为77.42%，对ABTS自由基平均清除率为93.31%，整体抗氧化水平稳定且表现良好。

综上，罗勒子总多酚具备天然抗氧化剂开发潜力，本研究工艺可为其资源高值化利用提供参考。当前天然抗氧化剂因安全性高、副作用小，在食品保鲜、保健品研发、化妆品添加剂等领域的需求日益增长，罗勒子作为一种储量丰富、来源广泛的药食同源植物，其多酚类成分的开发利用可实现资源的增值，减少资源浪费。

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