目的  建立测定甲磺酸酚妥拉明注射液中焦亚硫酸钠及硫酸钠含量的方法。

方法  采用离子色谱法，色谱柱为DionexIonPac AS11-HC柱（250 mm×4.0 mm，5  μm），以氢氧化钾溶液为淋洗液，梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，柱温为30 ℃，进样体积为25 μL。

结果  焦亚硫酸钠在10.596~211.920 μg/mL范围内线性关系良好（r=0.999 3），平均回收率100.00%（RSD=1.4%，n=9）；硫酸钠在1.027~20.540 μg/mL之间线性关系良好（r=0.999 8），平均回收率99.96%（RSD=1.8%，n=9）。

结论  建立的方法简便、准确、灵敏度高，适用于甲磺酸酚妥拉明注射液中焦亚硫酸钠及硫酸钠含量的测定。

甲磺酸酚妥拉明为α-受体阻滞剂，用于诊断嗜铬细胞瘤及治疗其所致的高血压发作，包括手术切除时出现的高血压，也可根据血压对本品的反应用于协助诊断嗜铬细胞瘤，治疗左心室衰竭及去甲肾上腺素静脉给药外溢，用于防止皮肤坏死[1-3]。本品在《中国药典（2020年版）》以及USP现行版、BP2023均有收载，本品分子结构中含有酚羟基，配制成溶液时，易氧化引起颜色变深，因此甲磺酸酚妥拉明注射液在工艺制备过程中，需添加抗氧剂焦亚硫酸钠。焦亚硫酸钠为功能性辅料，在人体内所释放的二氧化硫会降低人体代谢过程中各种酶的活性，从而影响人体对Ca²⁺和V_a族维生素的吸收，导致人体生长发育受到影响，甚至诱发支气管炎、多发性神经炎、骨髓萎缩、肝肾等重要脏器中毒和癌症等[1-3]。在现行甲磺酸酚妥拉明注射液收载的标准中均未检测其含量变化，故有必要建立合适的方法检测其含量。

目前，对焦亚硫酸钠的测定，常用检测方法有滴定法、UV法、液相色谱法和离子色谱法等 [4- 12]，各检测方法的特点见表1。焦亚硫酸钠氧化后产物为硫酸钠，本文采用离子色谱法同时测定甲磺酸酚妥拉明注射液中焦亚硫酸钠和硫酸钠的含量，为该制剂检测提供了一种简单、高效、准确的分析方法。

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  表格1 焦亚硫酸钠常见检测方法比较

  Table 1.Comparison of the common detection methods of sodium metabisulfite

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1 材料

1.1 主要仪器

Dionex ICS-5000+型离子色谱仪（美国赛默飞世尔科技公司）；XP205电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多，精度：十万分之一）。

1.2 主要药品与试剂

焦亚硫酸钠（Aladdin，批号：H2120387，纯度100%）；无水硫酸钠（批号：20150212，纯度99.0%）、葡萄糖（批号：20090319，比旋光度[α] +52.5~+53.0°）和甲醛（批号：202129，含量37.0%~40.0%）均购自国药集团化学试剂有限公司；纯化水为实验室自制；甲磺酸酚妥拉明（批号：YD221102，纯度99.8%）和甲磺酸酚妥拉明注射液（规格：1  mL ∶ 10 mg，共34批次）均由上海旭东海普药业有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DionexIonPac AS11-HC（250 mm× 4.0  mm, 5 µm）；检测器：电导检测器；流速：1.0  mL/ min；柱温：30 ℃；进样体积：25 μL；抑制电流：105 mA；淋洗液：氢氧化钾溶液（淋洗液自动发生器），梯度洗脱程序见表2。

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  表格2 梯度洗脱程序

  Table 2.Gradient elution procedure

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2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品贮备液

精密称取焦亚硫酸钠对照品105.96 mg，置100 mL棕色量瓶中，用稀释剂（0.2%甲醛水溶液）溶解并稀释至刻度，摇匀，得焦亚硫酸钠对照品贮备液，用作焦亚硫酸钠定位；精密称取硫酸钠对照品102.70 mg，置100 mL棕色量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，得硫酸钠对照品贮备液，用作硫酸钠定位。

2.2.2 混合对照品溶液

精密量取焦亚硫酸钠对照品贮备液10 mL、硫酸钠对照品贮备液1 mL置同一100 mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 供试品溶液

精密量取本品1 mL，置10 mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.4 阴性样品溶液

精密称取甲磺酸酚妥拉明200.11 mg、葡萄糖2 000.17 mg置20 mL量瓶中，加水稀溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL置10 mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 方法学验证

2.3.1 专属性试验

精密吸取空白溶液（稀释剂）、 阴性样品溶液、混合对照品溶液和供试品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，离子色谱图见图1。结果显示，空白溶液和阴性样品溶液不干扰焦亚硫酸钠、硫酸钠的检测，对照品溶液中焦亚硫酸根与硫酸钠的分离度为1.86，符合要求（分离度不得小于1.5）。

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  图1 离子色谱图

  Figure 1.Ion chromatogram

  注：A. 空白溶液；B. 阴性样品溶液；C. 焦亚硫酸钠定位溶液；D. 硫酸钠定位溶液；E. 混合对照品溶液 ；F. 供试品溶液；1. 焦亚硫酸钠；2. 硫酸钠。

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2.3.2 线性考察

焦亚硫酸钠线性溶液的制备：精密量取焦亚硫酸钠贮备液0.5，2，3，5，6，7，10 mL，分别置50 mL量瓶中，加稀释剂定容至刻度，摇匀，得10.596，42.384，63.576，105.960，127.150，148.340，211.920 μg/mL系列线性溶液；精密量取硫酸钠贮备液0.1，0.3，0.5，1，1.5，2 mL，分别置100 mL量瓶中，加稀释剂定容至刻度，摇匀，得1.027，3.081，5.135，10.270，15.405，20.540 μg/mL系列线性溶液；按“2.1”项下色谱条件进样分析，以样品浓度为横坐标（X， μg/ mL），峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，焦亚硫酸钠在10.596~211.920 μg/mL范围内线性关系良好，线性方程为Y=185.96X-1606.1（r=0.999 3）；硫酸钠在1.027~20.540 μg/mL之间线性关系良好，线性方程为Y=330.57X+2.4953（r=0.999 8）。

2.3.3 定量限与检测限

精密量取“2.2.2”项下混合对照品溶液，逐级稀释，取上述溶液按“2.1”项下色谱条件进样分析，定量限以信噪比为10 ∶ 1的浓度进行换算，检测限以信噪比为3 ∶ 1的浓度进行换算。计算得焦亚硫酸钠的定量限为0.20 μg/mL，检测限为0.06 μg/mL；硫酸钠的定量限为0.07 μg/mL，检测限为0.02 μg/mL。

2.3.4 精密度试验

取“2.2.2”项下混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，焦亚硫酸钠峰面积的RSD为0.5%（n=6），硫酸钠峰面积的RSD为0.6%（n=6），结果表明仪器精密良好。

2.3.5 重复性试验

精密量取同一样品（批号：D220904）1 mL置10 mL量瓶，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，平行配制6份供试品溶液；按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算得焦亚硫酸钠的平均含量为0.939  mg/mL，RSD为0.3%（n=6）；硫酸钠的平均含量为0.084 mg/mL，RSD为0.3%（n=6），结果表明该方法重复性良好。

2.3.6 稳定性试验

分别精密量取混合对照品溶液和供试品溶液（批号：D220904）1 mL置10 mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，按“2.1”项下色谱条件分别于0，2，4，8 h进样测定，计算得混合对照品溶液中焦亚硫酸钠的RSD为1.2%（n=4），硫酸钠的RSD为4.0%（n=4）；供试品溶液中焦亚硫酸钠的RSD为1.5%（n=4），硫酸钠的RSD为3.8%（n=4）；结果表明8 h内对照品溶液及供试品溶液稳定性良好。

2.3.7 回收率试验

精密量取“2.2.4”项下阴性样品溶液1 mL置10 mL量瓶中，共9份，精密加入“2.2.1”项下焦亚硫酸钠对照品贮备液0.8，1.0，1.2 mL，各3份，加稀释剂稀释至刻度，摇匀；同法配制硫酸钠回收率溶液；按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算得焦亚硫酸钠的平均回收率为100.00%（RSD=1.4%，n=9），硫酸钠的平均回收率为99.96%（RSD=1.8%，n=9），结果表明以上两种成分的回收率良好。

2.4 样品测定

精密称取各批次样品，制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，采用外标法计算焦亚硫酸钠和硫酸钠的含量，结果见表3。

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  表格3 样品检测结果（mg/mL）

  Table 3.Sample test results (mg/mL)

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3 讨论

试验过程发现空白辅料按处方配制后在实验室环境下放置1 h即明显可见溶液渐变微红，表明甲磺酸酚妥拉明在溶液状态下极易氧化，在与生产企业交流得知，本品生产工艺中配制样品的制药用水需采用通氮除氧处理，还需按处方加入1.0  mg/mL的抗氧化剂焦亚硫酸钠，本方法的建立可单独用于焦亚硫酸钠抗氧剂含量的检测。

焦亚硫酸钠氧化产物为硫酸钠，本方法在检测焦亚硫酸钠的同时，亦可检测产品中硫酸钠的含量；经方法学验证本方法专属性、灵敏度、准确度、重复性均良好；本方法流动相仅为水，对环境未造成污染，缺点是所用色谱柱需依靠进口，价格较昂贵。

从表3结果可知样品中焦亚硫酸钠含量在0.894~0.998 mg/mL之间，焦亚硫钠按处方投料计算降解量约为1 mg/mL，由于焦亚硫酸钠分解产生的亚硫酸盐对人体具有刺激性和一定的致癌性 [10]，提示处方中可以减少焦亚硫酸钠的使用量；硫酸钠含量在0.038~0.090 mg/mL之间，原因分析可能为不同批次样品使用药用水含氧浓度、配液放置时间和灌装时间的差异所致。

样品中所含焦亚硫酸钠与硫酸钠采用本法可行，诺含亚硫酸钠、亚硫酸氢钠采用本法时，不能与焦亚硫酸钠峰有效分离；另外后续可以尝试使用普通液相并采用磺酸型聚苯乙烯二乙烯基苯共聚体阳离子交换树脂H型色谱柱开发对焦亚硫酸钠的含量测定，以提高方法的普适性。

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