目的  建立大蓟和小蓟的超高效液相色谱（UPLC）特征图谱，并结合多成分含量测定，为区分大蓟和小蓟药材提供参考。

方法  采用Waters CORTEC setosum T3色谱柱（100  mm×2.1 mm，1.6 μm），以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱，流速为0.30  mL/ min，检测波长为330 nm，柱温为25℃，进样量为2 μL。分别建立12批大蓟和9批小蓟药材的特征图谱，通过对照品比对和光谱分析鉴定共有峰，并运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行相似度评价；进一步通过层次聚类分析（HCA）、主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）比较大蓟与小蓟的差异，筛选差异性成分；同时对比分析大蓟中7种有效成分与小蓟中5种有效成分的含量。

结果  大蓟和小蓟特征图谱均标定11个共有峰，其中大蓟指认9个、小蓟指认7个，分别为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、地奥司明、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、蒙花苷、柳穿鱼叶苷和柳穿鱼黄素。HCA与PCA分析均将大蓟和小蓟大致分为两类，OPLS-DA分析筛选出峰7、蒙花苷和地奥司明3个差异性标志物。含量测定结果显示，大蓟中地奥司明含量显著高于小蓟，而蒙花苷含量显著低于小蓟，且柳穿鱼叶苷和柳穿鱼黄素仅在大蓟中检出，小蓟中未检出。

结论  所建立的方法可有效鉴别大蓟与小蓟的药材质量差异，为其质量控制提供依据。

大蓟、小蓟始载于南朝梁时陶弘景《名医别录》，书中对两者的记载曰：“大蓟是虎蓟，小蓟是猫蓟，叶并多刺，相似，田野甚多”[1]。大蓟为菊科植物蓟（Cirsium japonicum Fisch. ex DC.）的干燥地上部分，主治凉血止血、散瘀解毒消痈，用于衄血、吐血、尿血、便血、崩漏、外伤出血、痈肿疮毒[2]。小蓟为菊科植物刺儿菜[Cirsium setosum（Wild.）MB.]的干燥地上部分，主治凉血止血、散瘀解毒消痈，用于衄血、吐血、尿血、血淋、便血、崩漏、外伤出血、痈肿疮毒[2]。大蓟的主要化学成分为黄酮类、甾醇类、木质素类、长链炔烯醇类、苷类和挥发油类化合物[3]。小蓟的主要化学成分为黄酮类、萜类、甾体类以及含氮类物质[4]。现代药理研究表明，大蓟具有凝血止血、抗肿瘤、抑菌、降血压、抗糖尿病等作用[3]；小蓟具有促凝血、抗炎、抑菌、降压等作用[4]。

大蓟和小蓟在历代本草中常见对比，二者性状相似，宋代寇宗奭《本草衍义》记载：“大小蓟皆相似，花如髻。但大蓟高三四尺，叶皱；小蓟高一尺许，叶不皱，以此为异”。《中国药典（2020年版）》指出二者主治功效相近，但历代本草记载与现代研究均表明其临床用药有所区别：唐代苏敬《新修本草》明确称“大小蓟皆能破血，但大蓟兼疗痈肿，而小蓟专主血，不能消肿”；唐代苏恭《本草求真》亦区别道“小蓟力微，不如大蓟力迅，只可退热凉血，若大蓟则于退热之中，犹于气不甚伤也”。

不仅是历代本草文献对二者有所区分，现代研究也进一步明确了大蓟与小蓟在临床应用中的区别：在出血治疗方面，大蓟主要用于消化道出血及肺结核咳血等内出血证，而小蓟则更长于治疗产后子宫收缩不全及血崩；在炎症应用上，大蓟多用于乳腺炎，小蓟则主要用于外伤感染[5]。此外，大蓟还可用于治疗结核病[6]及荨麻疹[7]，小蓟则常与侧柏叶、仙鹤草等配伍治疗肾性血尿 [8]。由此可见，对大蓟和小蓟进行准确区分，对临床合理用药具有重要意义。

目前关于小蓟和大蓟区别研究的文献相对较少，且多集中于显微鉴别与性状鉴别方面：梁鹂等[9]在显微特征上对二者进行了详细区分，宋晓光等[10]则从性状鉴别角度明确说明了大蓟与小蓟的差异。此外，张景景等[11]利用内转录间隔区2（internal transcribed spacer 2，ITS2）序列实现了对大蓟和小蓟的有效分子鉴定。在指纹图谱和含量测定方面的区分研究较为有限，张诗华等[12]采用中红外光谱结合化学计量学方法对二者进行鉴别；倪晓霓等[13]则通过HPLC法建立了两者黄酮类化合物的指纹图谱。易炳学等[14]研究了大蓟和小蓟的指纹图谱及含量测定，并分别指认了6个特征峰；相比之下，本研究在大蓟中指认了9个特征峰，在小蓟中指认了7个特征峰。

本研究选取大蓟及其近似种小蓟作为对比对象，通过建立二者的超高效液相色谱（ultra- performance liquid chromatography，UPLC）特征图谱，结合化学计量学方法系统分析药材间的化学成分差异，并对7种有效成分进行含量比较，以期为提升大蓟和小蓟的质量标准提供科学依据。

1 材料

1.1 主要仪器

Waters超高效液相色谱仪（H-Class系统，美国沃特世）；Thermo超高效液相色谱仪（Vanquish系统，美国赛默飞）；ME204E万分之一电子分析天平和XP26百万分之一电子分析天平均购自瑞士梅特勒-托利多公司；KQ500DE数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；HWS28恒温水浴锅（上海一恒科技有限公司）；Milli-Q Direct超纯水系统（默克股份有限公司）。

1.2 主要药品与试剂

对照品：绿原酸（批号：110753-202119，纯度96.3%）、咖啡酸（批号：110885-201703，纯度99.7%）、蒙花苷（批号：111528-202112，纯度98.0%）、柳穿鱼叶苷（批号：111728-201703，纯度99.6%）和地奥司明（批号：101348-201802，纯度97.3%）均购自中国食品药品检定研究院；芹菜素-7-葡萄糖醛酸苷（批号：21062901，纯度98.29%）和隐绿原酸（批号：21061801，纯度≥98%）购自成都格力普生物技术有限公司；新绿原酸（批号：DSTDX001501，纯度≥98%）和柳川鱼黄素（批号：DST200629-011，纯度98.85%）购自成都德思特生物技术有限公司；磷酸、甲醇和乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

本研究共收集12批大蓟药材和9批小蓟药材，所有样品均经广东一方制药有限公司孙冬梅主任中药师鉴定，确认为菊科植物蓟（Cirsium japonicum Fisch. ex DC.）的干燥地上部分及菊科植物刺儿菜[Cirsium setosum (Willd.) MB.]的干燥地上部分，详细样品信息见表1。

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  表格1 大蓟和小蓟药材详细信息

  Table 1.Sample detailed information table of Cirsium japonicum and Cirsium setosum

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2 方法与结果

2.1 指纹图谱研究

2.1.1 色谱条件

采用Waters CORTEC setosum T3色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.6 μm），以乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）为流动相进行梯度洗脱（0~3 min，5%→18% A；3~5 min，18% A；5~10 min，18%→19% A；10~20 min，19%→28% A；20~30 min，28%→70% A），流速为0.30 mL/min，检测波长为330 nm，柱温为25℃，进样量为2 μL。

2.1.2 混合对照品溶液的制备

取对照品新绿原酸、隐绿原酸、绿原酸、咖啡酸、地奥司明、蒙花苷、柳穿鱼叶苷、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、柳穿鱼黄素适量，精密称定，加70%甲醇制成每1 mL含新绿原酸10.643 μg、隐绿原酸10.791 μg、绿原酸20.517 μg、咖啡酸10.983 μg、地奥司明20.532 μg、蒙花苷101.430 μg、柳穿鱼叶苷82.767 μg、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷9.403 μg、柳穿鱼黄素9.358 μg的混合对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备

取本品粉末（过三号筛）约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.4 精密度试验

取大蓟（编号：DJ02）及小蓟（编号：XJ06）的供试品溶液，按“2.1.1”项色谱条件分别连续进样6次，大蓟以峰9为参照峰，小蓟以峰2为参照峰，分别计算各药材其余特征峰与参照峰的相对保留时间和相对峰面积，并计算RSD值。结果显示，大蓟相对保留时间RSD在0.13%~0.69%之间（n=6），相对峰面积RSD在0.64%~1.48%之间（n=6）；小蓟相对保留时间RSD在0.11%~0.35%之间（n=6），相对峰面积RSD在0.52%~1.87%之间（n=6），所有RSD值均小于3%，表明仪器精密度良好。

2.1.5 重复性试验

取同一批大蓟（编号：DJ02）及小蓟（编号：XJ06）药材，按“2.1.3”项方法平行制备6份供试品溶液，并按“2.1.1”项色谱条件进样测定，相对保留时间和相对峰面积RSD的计算方法同“2.1.4”项。结果显示，大蓟相对保留时间RSD在0.11%~0.50%之间（n=6），相对峰面积RSD在0.21%~1.19%之间（n=6）；小蓟相对保留时间RSD在0.52%~1.08%之间（n=6），相对峰面积RSD在1.20%~2.67%之间（n=6），所有RSD值均小于3%，表明该方法重复性良好。

2.1.6 稳定性试验

取同一大蓟（编号：DJ02）及小蓟（编号：XJ06）供试品溶液，室温放置，分别于0，2，4，6，8，12，24 h按“2.1.1”项色谱条件进样测定，相对保留时间和相对峰面积RSD的计算方法同“2.1.4”项。结果显示，大蓟相对保留时间RSD在0.70%~1.25%之间（n=7），相对峰面积RSD在0.55%~1.81%之间（n=7）；小蓟相对保留时间RSD在0.75%~1.40%之间（n=7），相对峰面积RSD在0.83%~2.50%之间（n=7），所有RSD值均小于3%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.1.7 相似度评价

分别取12批大蓟和9批小蓟药材样品，按“2.1.3”项方法制备供试品溶液，并在“2.1.1”项色谱条件下进行测定，记录色谱图。将各样品特征图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012年版），以S1样品为参照进行多点校正和峰匹配，生成对照特征图谱，大蓟和小蓟均标识出11个共有特征峰。样品特征图谱叠加图见图1，对照图谱见图2。经计算，12批大蓟样品与对照图谱的相似度在0.912~0.998之间，9批小蓟样品与对照图谱的相似度在0.997~1.000之间，均大于0.9，表明不同批次的大蓟和小蓟药材质量均一、稳定，且相似度较高。具体结果见表2。

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  图1 大蓟和小蓟特征图谱叠加图

  Figure 1.The characteristic chromatograms of different specifications of Cirsium japonicum and Cirsium setosum

  注：A：大蓟特征图谱；B：小蓟特征图谱。

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  图2 大蓟和小蓟特征图谱峰指认

  Figure 2.The characteristic chromatograms peak identification of Cirsium japonicum and Cirsium setosum

  注：A. 大蓟对照图谱；B. 小蓟对照图谱；C. 混合对照品：D. 空白溶剂；1. 新绿原酸；2. 绿原酸；3. 隐绿原酸；4. 咖啡酸；5. 地奥司明；6. 芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷；8. 蒙花苷；9. 柳穿鱼叶苷；11. 柳穿鱼黄素。

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  表格2 大蓟和小蓟对照特征图谱相似度评价结果

  Table 2.Evaluation results of the similarity of control characteristic chromatograms of Cirsium japonicum and Cirsium setosum

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2.1.8 共有峰指认

取“2.1.2”项下对照品溶液，按“2.1.1”项色谱条件进样分析，依据色谱峰保留时间及紫外3D光谱图，对大蓟和小蓟特征图谱中的11个共有特征峰进行指认，确定峰1为新绿原酸、峰2为绿原酸、峰3为隐绿原酸、峰4为咖啡酸、峰5为地奥司明、峰6为芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、峰8为蒙花苷、峰9为柳穿鱼叶苷、峰11为柳穿鱼黄素。其中，新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、地奥司明、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、峰7及蒙花苷为大蓟和小蓟的共有特征峰，结果见图2。

2.2 化学计量分析

2.2.1 层次聚类分析

采用IBM SPSS 24.0软件，以12批大蓟和9批小蓟的8个共有特征峰的峰面积积分值为变量进行层次聚类分析（hierarchical cluster analysis，HCA），当组间联接距离为5~10时，可将大蓟与小蓟分为两类，其中小蓟单独聚为一类，大蓟聚为另一类，结果见图3。

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  图3 21批大蓟药材和小蓟的HCA结果

  Figure 3.HCA result of 21 batches of Cirsium japonicum and Cirsium setosum

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2.2.2 主成分分析

采用SIMCA 14.1软件，以12批大蓟和9批小蓟的8个共有特征峰的峰面积积分值为变量进行主成分分析（principal component analysis，PCA），所建模型的R²X（表示模型在X轴方向上的累积解释能力）=0.937，Q²（表示模型的预测能力）=0.664（＞0.5），表明模型有效。Scores图（图4）显示大蓟和小蓟基本分为两类，该结果与聚类分析基本一致。

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  图4 21批大蓟药材和小蓟药材的PCA结果

  Figure 4.PCA scores of 21 batches of Cirsium japonicum and Cirsium setosum

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2.2.3 正交偏最小二乘法-判别分析

采用SIMCA 14.1软件，以共有指纹峰的峰面积积分值为变量进行正交偏最小二乘法-判别分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis，OPLS-DA），所建模型参数R²X=0.921，R²Y=0.973（表示模型在Y轴方向上的累积解释能力），Q²=0.952（大于0.5），表明模型有效。Scores图（图5）显示大蓟和小蓟明显分为两类；通过置换检验（图6）对该模型随机排列200次，结果显示置换检验参数R²和Q²的截距分别为0.141和-0.598，且原始模型的R²和Q²值均位于置换分布右上方，高于随机排列后的数值，表明所建OPLS-DA模型未出现过拟合，可用于大蓟和小蓟药材的模式识别。变量投影重要性（variable importance in projection，VIP）图（图7）显示各变量对分类的影响程度由大到小依次为：地奥司明＞蒙花苷＞峰7＞绿原酸＞隐绿原酸＞芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷＞新绿原酸＞咖啡酸。以VIP值大于1.0作为显著性标准，共筛选出3个差异标志物，分别为地奥司明、蒙花苷和峰7。

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  图5 21批大蓟药材和小蓟药材的OPLS-DA结果

  Figure 5.OPLS-DA scores of 21 batches of Cirsium japonicum and Cirsium setosum

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  图6 OPLS-DA模型置换验证图

  Figure 6.OPLS-DA model permutation test diagram

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  图7 差异性标志物VIP图

  Figure 7.VIP map of different markers

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2.3 含量测定

2.3.1 色谱条件

同“2.1.1”项。

2.3.2 混合对照品溶液的制备

取对照品绿原酸、咖啡酸、地奥司明、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、蒙花苷、柳穿鱼叶苷和柳穿鱼黄素适量，精密称定，加70%甲醇制成每1 mL含绿原酸 20.625 μg、咖啡酸11.135 μg、地奥司明21.278 μg、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷10.245 μg、蒙花苷100.675 μg、柳穿鱼叶苷82.853 μg、柳穿鱼黄素10.135 μg的混合对照品溶液。

2.3.3 供试品溶液的制备

同“2.1.3”项。

2.3.4 线性关系考察

取绿原酸、咖啡酸、地奥司明、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、蒙花苷、柳穿鱼叶苷和柳穿鱼黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含绿原酸208.509 μg、咖啡酸5.709 μg、地奥司明593.958 μg、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷75.762 μg、蒙花苷929.589 μg、柳穿鱼叶苷360.393 μg和柳穿鱼黄素12.312 μg的对照品储备液。精密移取上述对照品储备液0.04、0.5、2.0、6.0、8.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得到系列浓度的对照品稀释液。依次吸取对照品储备液及各稀释液，按“2.3.1”项色谱条件进样分析，以各对照品浓度（X，μg/mL）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归。表3结果显示，绿原酸、咖啡酸、地奥司明、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、蒙花苷、柳穿鱼叶苷和柳穿鱼黄素的r均大于0.999 5，表明以上7种成分在相应浓度范围内，浓度与峰面积线性关系良好。

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  表格3 含量测定线性考察结果

  Table 3.Results of linear inspection of content determination

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2.3.5 精密度试验

取“2.3.2”项混合对照品溶液，按“2.3.1”项色谱条件连续进样6次，分别测定绿原酸、咖啡酸、地奥司明、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、蒙花苷、柳穿鱼叶苷、柳穿鱼黄素峰面积，计算得各成分峰面积的RSD在0.13%~1.14%范围内（n=6），均小于3%，表明该仪器精密度良好。

2.3.6 稳定性试验

分别取同一大蓟（编号：DJ02）和小蓟（编号：XJ06）供试品溶液，室温放置，分别于0、2、4、6、8、12、24 h按“2.3.1”项色谱条件进样测定，计算得大蓟中绿原酸、咖啡酸、地奥司明、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、蒙花苷、柳穿鱼叶苷和柳穿鱼黄素峰面积的RSD在0.29%~1.96%范围内（n=7），小蓟中绿原酸、咖啡酸、地奥司明、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷和蒙花苷面积的RSD在0.45%~1.08%范围内（n=7），均小于3%，表明供试品溶液在室温条件下24 h内稳定性良好。

2.3.7 重复性试验

各取大蓟粉末（编号：DJ02）和小蓟粉末（编号：XJ06）约0.5 g，精密称定，平行6份，按“2.3.3”项方法制备供试品溶液，并按“2.3.1”项色谱条件进样测定，计算得大蓟中绿原酸、咖啡酸、地奥司明、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、蒙花苷、柳穿鱼叶苷和柳穿鱼黄素的平均含量分别为0.736、0.058、5.928、0.317、6.946、3.594、0.054 mg/g，RSD在0.12%~1.45%范围内（n=6）；小蓟中绿原酸、咖啡酸、地奥司明、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷和蒙花苷的平均含量分别为0.875、0.029、0.354、0.197、9.216 mg/g，但未检出柳穿鱼黄素和柳穿鱼叶苷，RSD在0.75%~2.09%范围内（n=6），均小于3%，表明该方法重复性良好。

2.3.8 加样回收率试验

各取大蓟粉末（编号：DJ02）和小蓟粉末（编号：XJ06）约0.25 g，精密称定，平行9份，按样品与对照品含量比为0.5 ∶ 1、1 ∶ 1和1 ∶ 1.5的比例，加入绿原酸、咖啡酸、地奥司明、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、蒙花苷、柳穿鱼叶苷和柳穿鱼黄素对照品，每种比例样品平行3份，按“2.3.1”项色谱条件进样测定，计算得大蓟中绿原酸、咖啡酸、地奥司明、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、蒙花苷、柳穿鱼叶苷和柳穿鱼黄素的平均回收率分别为100.23%、96.87%、100.71%、97.49%、99.34%、100.19%、98.28%，RSD在0.19%~2.71%范围内（n=9）；小蓟中绿原酸、咖啡酸、地奥司明、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷和蒙花苷含量的回收率均值分别为101.37%，96.18%、99.76%、98.31%、99.13%，RSD在1.72%~2.11%范围内（n=9）；表明该方法回收率良好。

2.3.9 样品测定

取12批大蓟和9批小蓟药材样品，按“2.3.3”项方法分别制备供试品溶液，每批平行2份，按“2.3.1”项色谱条件进样测定，采用外标法计算绿原酸、咖啡酸、地奥司明、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、蒙花苷、柳穿鱼叶苷和柳穿鱼黄素的含量，结果见表4。采用SPSS 20.0软件，以各共有成分含量为变量进行曼-惠特尼秩和检验，结果显示：绿原酸（P=0.028）、地奥司明（P＜0.001）、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷（P=0.049）、蒙花苷（P=0.001）、柳穿鱼叶苷（P＜0.001）和柳穿鱼黄素（P＜0.001）的P均小于0.05，而咖啡酸（P=0.345）无显著差异。在α=0.05检验水准下，除咖啡酸外，其余6种成分在大蓟与小蓟中的含量分布差异均具有统计学意义。

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  表格4 样品含量测定结果（mg/g，n=2）

  Table 4.Results of sample determination (mg/g, n=2)

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3 讨论

3.1 供试品溶液制备

本研究通过单因素试验，以色谱峰“总峰面积/称样量”及绿原酸、地奥司明、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、蒙花苷、柳穿鱼叶苷和柳穿鱼黄素的含量为综合评价指标，分别考察了提取溶剂（甲醇、70%甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇、50%乙醇）、提取方式（超声提取与加热回流）及提取时间（15、30、60 min）对特征图谱和各成分含量测定的影响，最终确定供试品溶液的最佳制备方法为甲醇加热回流提取30 min。

3.2 特征图谱的建立及分析

特征图谱研究结果显示，大蓟的UPLC特征图谱共标定11个共有峰，并通过对照品指认出其中9个特征性成分，分别为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、地奥司明、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、蒙花苷、柳穿鱼叶苷和柳穿鱼黄素；小蓟的UPLC特征图谱同样标定11个共有峰，指认其中7个成分，分别为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、地奥司明、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷和蒙花苷。研究中分别考察了3种酸溶液（0.1%磷酸溶液、0.5%冰醋酸溶液、0.2%甲酸溶液）、5种不同型号色谱柱[Waters CORTEC setosum T3（100 mm×2.1 mm，1.6 μm）、SHIMADZU Shim-pack Scepter C₁₈（100 mm×2.1 mm，1.9 μm）、YMC Triart C₁₈（100 mm×2.1 mm，1.9 μm）、Agilent ZORBAX SB-C₁₈（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）和Waters HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）]，同时比较了不同检测波长（254、310、330、370 nm）、流速（0.28、0.30、0.32 mL/min）及柱温（23、25、27℃）对大蓟和小蓟特征图谱色谱行为的影响。最终确定采用Waters CORTEC setosum T3色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.6 μm），以0.1%磷酸溶液为水相，在检测波长330 nm、柱温25℃、流速0.30  mL/min的色谱条件下，所得色谱峰分离度良好、基线平稳，且色谱峰信息丰富，信号响应较高。

3.3 大蓟和小蓟化学成分的区别

本研究建立了大蓟和小蓟药材的UPLC特征图谱。大蓟图谱共标定11个共有峰，并通过对照品指认了其中9个成分，分别为：峰1（新绿原酸）、峰2（绿原酸）、峰3（隐绿原酸）、峰4（咖啡酸）、峰5（地奥司明）、峰6（芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷）、峰8（蒙花苷）、峰9（柳穿鱼叶苷）和峰11（柳穿鱼黄素）。小蓟图谱同样标定11个共有峰，指认其中7个成分，分别为：峰1（新绿原酸）、峰2（绿原酸）、峰3（隐绿原酸）、峰4（咖啡酸）、峰5（地奥司明）、峰6（芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷）和峰8（蒙花苷）。大蓟色谱图中的峰9、峰10和峰11，以及小蓟色谱图中的峰12、峰13和峰14分别为两药材的特征峰，但目前尚未明确这6个特征峰的具体成分。通过HCA、PCA和OPLS-DA分析，均可实现大蓟与小蓟的明显区分；进一步分析表明，地奥司明、蒙花苷和峰7是区分两者的关键差异性成分，后续可针对这3种成分作为鉴别大蓟和小蓟药材的重要切入点展开深入研究。

本研究对大蓟色谱图中分离度良好、稳定性高且纯度较高的7种化学成分（绿原酸、咖啡酸、地奥司明、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、蒙花苷、柳穿鱼叶苷和柳穿鱼黄素）与小蓟色谱图中符合相同标准的5种成分（绿原酸、咖啡酸、地奥司明、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷和蒙花苷）进行了含量测定。黄酮类化合物作为大蓟和小蓟的主要有效成分，本研究结果显示，地奥司明和蒙花苷是区分两者的差异标志物：大蓟中地奥司明含量显著高于小蓟，而除个别批次外，大蓟中蒙花苷含量多数低于小蓟。此外，柳穿鱼叶苷和柳穿鱼黄素仅在大蓟中检出。

3.4 小结

大蓟与小蓟虽性状相似且在现行药典中功效描述相近，但结合历代本草记载与现代研究可知，二者在主治功效、有效成分及临床应用方面均存在一定差异。本研究通过比较大蓟7种有效成分与小蓟5种有效成分的含量差异，并结合二者药理作用与功效特点，提示临床实践中应明确区分并分别标注大蓟与小蓟的使用，以更精准地体现中医辨证施治原则，提升治疗效果。同时，当前中国药典中将大蓟与小蓟功效主治归为相近的表述不够严谨，有待进一步深入研究与完善。

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