目的  对沧江糙苏的化学成分及其体外抗肿瘤细胞活性进行研究。

方法  通过正反相硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱、HPLC等色谱技术对沧江糙苏95%乙醇水提取物及90%石油醚-10%三氯甲烷混合液提取物的化学成分进行分离，运用核磁共振、质谱、红外光谱、紫外光谱等方法对化合物进行分析鉴定，通过CCK-8法进行化合物抗肿瘤细胞活性的筛选。

结果  从沧江糙苏提取物中分离鉴定得18个化合物，具体为：salvialoside A（1）、毛蕊花糖苷（2）、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷（3）、alyssonoside（4）、8-O-乙酰山栀苷甲酯（5）、5,9-epi-7,8-didehydropens-temoside（6）、胡麻属苷（7）、十四烷酸（8）、胡萝卜苷（9）、compound VI（10）、乙基-β-D-糖苷（11）、6,9-epi-8-O-乙酰山栀苷甲酯（12）、山栀苷甲酯（13）、5,9-epi-phlomiol（14）、phlomiol （15）、5,9-epi-penstemoside（16）、落叶松脂醇-9-O-β-D-葡萄糖苷（17）、巴西木素（18）。不同浓度（40、8、1.6、0.32、0.064 μmol/L）化合物14、15、16对HCT-15细胞有一定的抑制作用，随着药物浓度增加，抑制率增加，其中化合物14的半数抑制浓度为（5.86±0.77） μmol/ L。

结论  compound VI、落叶松脂醇-9-O-β-D-葡萄糖苷、巴西木素（分别为化合物10、17、18）为该属首次分离得到的化合物。化合物1~18为首次从沧江糙苏中分离。化合物14可抑制HCT-15细胞增殖，具有一定的抗肿瘤活性。

糙苏属（Phlomis Linn.）是植物界被子植物门木兰纲唇形目（Lamiales）唇形科（Labiatae）的其中一个属，该属多为多年生草本，在全球约有100种以上，生长地区为地中海、亚洲中部、东部，中国有41种，其中西南区最多[1]。该植物喜阴，其中大部分生长环境为森林、草坡、灌丛及潮湿地区等。糙苏属植物含有多种有效化学成分，主要有环烯醚萜、黄酮类、苯乙醇苷、二萜类、三萜类、挥发油和其他物质等[2- 12]。其中沧江糙苏Phlomoides ambigua（Hand.-Mazz.）Kamelin & Makhm.为糙苏属多年生草本植物，分布在云南地区的灌丛中，已被列入《世界自然保护联盟濒危物种红色名录》（International Union for Conservation of Nature，IUCN）—近危（Near Threatened，NT）[1]，其相关化学成分及生物活性研究目前未见报道。本实验为首次研究沧江糙苏的化学成分及生物活性，通过正反相硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱、HPLC等色谱技术对沧江糙苏95%乙醇水提取物及90%聚乙烯（petroleum ether，PE）-10%三氯甲烷（CHCl₃）混合液提取物的化学成分进行分离，并通过CCK-8法进行化合物抗肿瘤细胞活性的筛选，进一步丰富糙苏属单体化合物，也为沧江糙苏药物的开发利用提供一定的理论依据。

1 材料

1.1 主要仪器

Avance Ⅲ 400 MHz和600 MHz核磁共振仪（德国布鲁克公司）；1260高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；UltraScan ESI-MS超高效液相色谱四极杆飞行时间串联质谱仪 （美国沃特世公司）；FA2004B分析天平（上海越平科学仪器有限公司）；DS-30CK超声波清洗仪（深圳市东森科技有限公司）；334887-16636二氧化碳培养箱和1510-01083酶标仪购自美国赛默飞世尔科技。

1.2 主要药品与试剂

沧江糙苏药材采自云南省保山昌宁，经云南民族大学民族医药学院杨青松教授鉴定为沧江糙苏Phlomoides ambigua（Hand.-Mazz.） Kamelin & Makhm.；二甲基亚砜（北京索莱宝科技有限公司，批号：D8731）；DMEM培养基（德国VivaCell公司，批号：06-1055-57-1ACS）；CCK-8试剂盒（Proteintech，批号：20010548）；磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）为实验室自配；甲醇和乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为娃哈哈饮用纯净水。

1.3 细胞

人肝癌（HepG2）和人结直肠腺癌（HCT-15）细胞购自中国上海科学院细胞库，实验室自行传代后培养冻存。

2 方法与结果

2.1 沧江糙苏浸膏提取及化合物分离

取粉碎后的干燥沧江糙苏全草18 kg，用90% PE-10% CHCl₃混合液超声（功率：1.5  kW，频率：40 kHz）提取3次（料液比为1 ∶ 10，室温浸泡24 h后超声10 h），过滤减压浓缩得浸膏 229.3 g（密度为0.93 g/mL），经中压反相色谱柱（聚酰胺-MCI）梯度洗脱（70%~100%甲醇）得到各组分。滤渣再用95%乙醇进行超声（功率：1.5 kW，频率：40 kHz）提取3次（料液比为1  ∶  10，室温浸泡24 h后超声10 h），减压浓缩得到浸膏1.9 kg（密度为1.18 g/mL），浸膏经硅胶柱及中压反相色谱柱（聚酰胺-MCI）梯度洗脱（70%~100%甲醇）得到各组分。

PE-CHCl₃混合液提取浸膏：229.3 g浸膏经中压反相色谱柱（聚酰胺-MCI）梯度洗脱得到15个组分（Fr.A~Fr.O）。其中Fr.C（1.0 g）经硅胶柱梯度洗脱（二氯甲烷-甲醇=1 ∶ 0~0 ∶ 1）得到Fr.C.1~Fr.C.19共19个组分，Fr.C.8（367.4  mg）经凝胶柱（甲醇）冲洗得到Fr.C.8.1~Fr.C.8.11共11个组分，Fr.C.8.2（18.1 mg）通过半制备HPLC分离得到化合物1 [3.5 mg，流动相为乙腈-水（23  ∶  77），流速为3.0 mL/min，保留时间为9  min]，Fr.C.8.10（11.6 mg）通过半制备HPLC分离得到化合物2 [3.6 mg，流动相为乙腈-水（20 ∶  80），流速为3.0 mL/min，保留时间为16  min]，Fr.C.8.8（33.5 mg）过滤得到化合物3（10.8  mg）。Fr.B（17 g）经硅胶柱梯度洗脱（二氯甲烷-甲醇=1 ∶ 0~0 ∶ 1）得到Fr.B.1~Fr.B.20共20个组分，经TLC点板检测，将Fr.B.6（1.2  g）和Fr.C.6（145 mg）合并，经多次正相硅胶柱层析后得到化合物4（8.8 mg），其中一个组分（665.3  mg）经硅胶柱（二氯甲烷-甲醇）多次洗脱得到化合物5（54 mg）和化合物6（5.5  mg），另一组分（30 mg）通过半制备HPLC分离得到化合物7 [15.3 mg，流动相为甲醇-水（25 ∶ 75），流速为3.0 mL/min，保留时间为4  min]。经TLC点板检测，将Fr.N（2.0 g）和Fr.O（2.8 g）合并，通过硅胶柱梯度洗脱（二氯甲烷-乙酸乙酯 =1  ∶  0~0 ∶ 1）后得到Fr.N+O.1~Fr.N+O.12共12个组分，其中Fr.N+O.11（29.9 mg）经凝胶柱（甲醇）冲洗得到化合物9（6.6 mg），Fr.N+O.3经硅胶柱多次洗脱得到化合物8（35 mg），Fr.N+O.1（1.1  g）经硅胶柱层析（石油醚-二氯甲烷）得到化合物10（9 mg）。

95%乙醇提取浸膏：1.9 kg浸膏经硅胶柱梯度洗脱（二氯甲烷-甲醇=1 ∶ 0~0 ∶ 1）得到Fr.a~Fr.g共7个组分，其中Fr.d（595 g）经硅胶柱梯度洗脱（二氯甲烷-甲醇=1 ∶ 0~0 ∶ 1）得到Fr.d.1~Fr.d.9共9个组分，合并Fr.d.5~7三部分，共300 g，后通过中压反相色谱柱（聚酰胺-MCI）梯度洗脱（40%~100%甲醇）得到19个部分，取Fr.d.5-7.4（50 g）聚酰胺粉拌样经反相C₁₈梯度洗脱（10%~100%甲醇）得到Fr.d.5-7.4.1~ Fr.d.5-7.4.12共12个组分，Fr.d.5-7.4.2（10.1 g）经硅胶柱梯度洗脱（二氯甲烷-甲醇 =15 ∶ 1~1 ∶ 1）得到化合物11（3.0 g）；Fr.d.5-7.4.9（1.3 g）经硅胶柱梯度洗脱（二氯甲烷-甲醇 =30 ∶ 1~1 ∶ 1）得化合物12（299.9 mg）；Fr.d.5-7.4.4（1.45 g）聚酰胺粉拌样反相C₁₈梯度洗脱（5%~60%甲醇）且经多次硅胶冲洗后得到化合物13（25 mg）；Fr.d.5-7.4.2.15（340 mg）经硅胶柱梯度洗脱（二氯甲烷-甲醇=60 ∶ 1~ 1 ∶ 1）得化合物14（32.5 mg）；Fr.d.5-7.4.4（1.5 g）聚酰胺粉拌样经反相C₁₈梯度洗脱（5%~60%甲醇）其中一个组分为Fr.d.5-7.4.4.9（112 mg），经半制备HPLC分离得化合物15 [16.2 mg，流动相为甲醇-水（20 ∶ 80），流速为3.0 mL/min，保留时间为38 min]；Fr.d.5-7.4.7-8（2.9 g）经硅胶柱梯度洗脱（二氯甲烷-甲醇=80 ∶ 1~1 ∶ 1）后得到Fr.d.5-7.4.7-8.1~Fr.d.5-7.4.7-8.10共10个组分，其中Fr.d.5-7.4.7-8.5-7（92.4 mg）经半制备HPLC分离得化合物16 [10 mg，流动相为甲醇-水（25 ∶ 75），流速为3.0 mL/min，保留时间为27 min]；取Fr.d.5-7.7（7.9 g）经硅胶柱梯度洗脱（二氯甲烷-甲醇 =80 ∶ 1~1 ∶ 1）得到Fr.d.5-7.7.1~Fr. d.5-7.7.8共8个组分，Fr.d.5-7.7.7（17.6 mg）经半制备HPLC分离得到化合物17 [6 mg，流动相为甲醇-水（30 ∶ 70），流速为3.0 mL/min，保留时间为6 min]；Fr.d.5-7.7.4（761.4 mg）经凝胶（甲醇）多次洗脱得到化合物18（10 mg）。

2.2 结构鉴定

化合物1无色无定形粉末，分子式：C₃₄H₄₆O₂₁，相对分子质量（relative molecular mass，Mr）：790.24；¹H-核磁共振（nuclear magnetic resonance，NMR）（400 MHz， CD₃OD）化学位移（δ_H）：7.55（1H，d，J=1.5 Hz，H-3），7.37（2H，s，H-2"，6"），5.88（1H，d，J=3.7 Hz，H-1），5.49（1H，dd，J=5.3，2.1 Hz，H-6），5.11（1H，d，J=7.5 Hz，H-1"'），4.70（1H，d，J=7.9 Hz，H-1'），3.93（1H，dd，J=12.0，2.2 Hz，H-6"'b），3.91（6H，s，3"-OCH₃，5"-OCH₃），3.78（1H，dd，J=12.0，2.4 Hz，H-6'b），3.68（3H，s，OCH₃），3.64（1H，d，J=3.4 Hz，H-6"'a），3.52（1H，m，H-6'a），3.48（1H，dd，J=9.1，8.0 Hz，H-2"'），3.45（1H，d，J=2.6 Hz，H-5），3.43~3.24（6H，m，H-3'，4'，5'，3"'，4"'，5"'），3.22（1H，dd，J=9.0，8.3 Hz，H-2'），3.07（1H，dd，J=8.6，3.6 Hz，H-9），2.49（1H，d，J=15.7 Hz，H-7b），2.26（1H，dd，J=15.7，5.6 Hz，H-7a），1.90（3H，s，8-OAc），1.61（3H，s，H-10）；
¹³C-NMR）100 MHz，CD₃OD）δ_C：173.3（8-OAc），169.1（C-11），167.4（C-α），155.1（C-3），154.9（C-3"，5"），141.2（C-4"），128.0（C-1"），109.4（C-2"，6"），109.3（C- 4），105.0（C- 1"'），100.9（C-1'），96.0（C-1），90.4（C-8），80.6（C-6），79.1（C-5'，5"'），78.6（C-3"'），78.5（C-3'），76.4（C-2"'），75.3（C-2'），72.3（C-4"'），72.0（C-4'），63.6（C-6"'），63.2（C-6'），57.9（C-3"，5"-OCH₃），52.5（OCH₃），51.0（C-9），45.7（C-7），40.7（C-5），22.9（8-OAc），22.4（C-10）。经与文献^[13]核对，数据基本相同，化合物1为salvialoside A。

化合物2白色固体，分子式：C₂₉H₃₆O₁₅，Mr：624.59；¹H-NMR（400 MHz，C₅H₅N）δ_H：8.04（1H，d，J=15.8 Hz，H-β'），7.21（1H，s，H-6'），7.19（1H，d，J=1.2 Hz，H-2'），7.18（1H，d，J=4.6 Hz，H-5'），6.76（1H，s，H-2），6.71（1H，m，H-α'），6.29（1H，d，J=1.7 Hz，H-5），4.83（1H，s，H-1"），4.81（1H，m，H-1"'），4.53（1H，d，J=3.4 Hz，H-6'a），4.51（1H，d，J=3.5 Hz，H-6'b），4.47（1H，m，H-2"'），4.30~4.24（2H，m，H-5"，4"），4.20（1H，dd，J=12.3，2.3 Hz，H-3"'），4.11（1H，dd，J=12.3，5.7 Hz，H-5"'），4.00（2H，dd，J=7.8，5.4 Hz，H-α），3.86（1H，dt，J=9.5，7.4 Hz，H-3"），2.92（2H，t，J=7.4 Hz，H-β），1.65（3H，d，J=6.1 Hz，H-6"'）；¹³C-NMR（100 MHz，C₅H₅N）δ_C：167.7（C=O），150.9（C-3），149.9（C-4），148.3（C-4'），147.7（C-β'），146.2（C-3'），131.0（C-1），127.6（C-1'），122.9（C-6'），121.0（C-6），118.1（C-5），117.3（C-5'），117.1（C-2），116.4（C-2'），115.4（C-α'），104.8（C-1"），103.7（C-1"'），81.1（C-2"），77.0（C-3"），76.5（C-5"），74.6（C-4"'），73.2（C-3"'），71.8（C-α），70.9（C-5"'），70.8（C-4"），62.7（C-6"），36.6（C-β），19.8（C-6"'）。经与文献^[14]核对，数据基本相同，化合物2为毛蕊花糖苷。

化合物3黄色粉末，分子式：C₂₁H₂₀O₁₁，Mr：448.38；¹H-NMR（400 MHz，DMSO-d₆）δ_H：12.99（1H，s，5-OH），7.45（1H，dd，J= 8.3，2.3 Hz，H-6'），7.42（1H，d，J=2.3 Hz，H-2'），6.91（1H，d，J=8.4 Hz，H-5'），6.79（1H，d，J=2.2 Hz，H-8），6.75（1H，s，H-3），6.45（1H，d，J=2.2 Hz，H-6），5.09（1H，d，J=7.3 Hz，H-1''），3.72 （1H，m，H-6''b），3.47（1H，s，H-6''a），3.44（1H， s，H-3''），3.31（1H，s，H-2''），3.27（1H，s，H-5''），3.20（1H，d，J=8.8 Hz，H-4''）；¹³C-NMR（100 MHz，DMSO-d₆）δ_C：182.3（C- 4），164.9（C- 7），163.4（C-2），161.6（C-5），157.4（C-9），150.4（C-4'），146.2（C-3'），121.8（C-1'），119.6（C-6'），116.4（C-5'），114.0（C-2'），105.8（C-3），103.6（C-10），100.3（C-1"），100.0（C-6），95.1（C-8），77.6（C-4"），76.8（C-3"），73.5（C-2"），70.0（C-5"），61.0（C-6"）。经与文献^[15]核对，数据基本相同，化合物3为luteolin-7-O-β-D-glucopyranoside。

化合物4浅黄色无定形粉末，分子式：C₃₅H₄₆O₁₉，Mr：770.24；¹H-NMR（400 MHz，CD₃OD）δ_H：7.68（1H，d，J=15.9 Hz，H-7'），7.22（1H，d，J=2.0 Hz，H-2'），7.10（1H，dd，J= 8.2，2.0 Hz，H-6'），6.82（1H，m，H-6），6.70（1H，d，J=7.8 Hz，H-2），6.59（1H，dt，J=8.0，2.1 Hz，H-5'），6.39（1H，d，J=15.9 Hz，H-8'），5.21（1H，d，J=1.7 Hz，H-1'''），4.96（1H，s，H-1""），4.38（1H，d，J=8.0 Hz，H-1"），4.02（1H，m，H-8），2.81（1H，d，J=3.1 Hz，H-7），1.11（3H，d，
J=6.1 Hz，H-6"'）；¹³C-MMR（100 MHz，CD₃OD）δ_C：168.8（C=O），151.4（C-3'），150.0（C-4'），148.6（C-β'），146.7（C-2），145.3（C-3），132.1（C-1），128.3（C-1'），125.0（C-6'），121.9（C-6），117.8（C-5），117.1（C-5'），117.0（C-2），115.8（C-α'），112.5（C-2'），111.7（C-1""），104.9（C-1"），103.6（C-1"'），82.1（C-3"），81.2（C-3""），78.7（C-2""），76.8（C-2"），75.7（C-4""），75.2（C-5"），74.4（C-4"'），73.0（C-2"'），72.9（C-α），72.7（C-3"'），71.6（C-4"），71.1（C-5"'），69.1（C-6"），66.3（C-5""），57.1（C-5'OCH₃），37.2（C-β），19.0（C-6"'）。经与文献^[16]核对，数据基本相同，化合物4为alyssonoside。

化合物5无定形粉末，分子式：C₁₉H₂₈O₁₂，Mr：448.42；¹H-NMR（400 MHz，CD₃OD）δ_H：7.40（1H，d，J=1.4 Hz，H-3），5.87（1H，d，J=2.4 Hz，H-1），4.60（1H，d，J=7.9 Hz，H-1'），4.29（1H，dt，J=4.9，2.2 Hz，H-6），3.86（1H， dd，J=12.1，2.1 Hz，H-6'b），3.68（3H，s， OCH₃），3.63（1H，d，J=5.9 Hz，H-6'a），3.34（1H，t，J=8.8 Hz，H-3'），3.29（1H，dd，J=9.2，2.3 Hz，H-9），3.24（1H ，d，J=9.0 Hz，H-5'），3.13（1H，m，H-4'），3.03（1H，dd，J=8.9，1.7 Hz，H-5），2.96（1H，dd，J=8.9，2.4 Hz，H-2'），2.16（1H，m，H-7b），2.00（1H，d，J=5.5 Hz，H-7a），1.98（3H，s，OCOCH₃），1.47（3H，s，H-10）；¹³C-NMR（100 MHz，CD₃OD）δ_C：173.3（OCOCH₃），169.2（C-11），153.9（C- 3），110.0（C-4），100.5（C-1'），95.9（C-1），89.9（C-8），78.4（C-5'），78.1（C-3'），76.1（C-6），74.8（C-2'），71.8（C-4'），63.1（C-6'），52.0（OCH₃），50.1（C-9），47.8（C-7），42.4（C-5），22.4（OCOCH₃），22.4（C-10）。经与文献^[17]核对，数据基本相同，化合物5为barlerin（8-O-acetyl-shanzhiside methyl ester）。

化合物6淡黄色无定形固体，分子式：C₁₇H₂₄O₁₁，Mr：404.13；¹H-NMR（400 MHz，CD₃OD）δ_H：7.47（1H，s，H-3），5.81（1H，d，J=2.6 Hz，H-1），5.50（1H，td，J=2.5，1.5 Hz，H-7），4.53（1H，d，J=7.9 Hz，H-1'），4.48（1H，dd，J=2.6，1.3 Hz，H-6），3.88（1H，dd，J=12.0，2.2 Hz，H-6'b），3.69（3H，s，11-CH₃），3.62（1H，m，H-6'a），3.35（1H，d，J=8.9 Hz，H-3'），3.23（1H，m，H-5'），3.19（1H，d，J=2.5 Hz，H-4'），3.16（1H，m，H-2'），3.09（1H，tt，J=2.6，1.3 Hz，H-9），1.77（3H，q，J=1.3 Hz，H-10）；¹³C-NMR（100 MHz，
CD₃OD）δ_C：168.4（C=O），155.4（C-3），143.7（C-8），129.1（C-7），112.9（C-4），100.1（C-1'），95.0（C-1），79.0（C-5'），78.7（C-6），77.6（C-3'），74.5（C-2'），73.8（C-4'），71.9（C-5），63.0（C-6'），56.9（C-9），51.9（OCOCH₃），16.0（C-10）。经与文献^[18]核对，数据基本相同，化合物6为5,9-epi-7，8-didehydropenstemoside。

化合物7白色粉末，分子式：C₁₇H₂₄O₁₂，Mr：
420.13；¹H-NMR（400 MHz，CD₃OD）δ_H：7.60
（1H，s，H-3），5.51（1H，d，J=8.7 Hz，H-1），4.74（1H，d，J=7.8 Hz，H-1'），4.34（1H，d，J=1.7 Hz，H-6），3.76（3H，s，OCH₃），3.26（1H，d，J=1.6 Hz，H-7），3.21~3.94（6H，m，H-2'，3'，4'，5'，6'），2.54（1H，d，J=8.7 Hz，H-9），1.52（3H，s，H-10）；¹³C-NMR（100 MHz，CD₃OD）δ_C：169.1（C=O），155.5（C-3），113.1（C-4），99.9（C-1'），96.8（C-1），78.7（C-3'），77.7（C-5'），77.6（C-6），74.9（C-5），74.7（C-2'），71.7（C-4'），66.0（C-7），63.8（C-8），63.0（C-6'），54.4（C-9），52.2（C-11-CH₃），17.8（C-10）。经与文献^[19]核对，数据基本相同，化合物7为胡麻属苷。

化合物8白色颗粒状晶体，分子式为C₁₄H₂₈O₂，Mr：228.21；¹H-NMR（400 MHz，CDCl₃）δ_H：2.65（2H，t，J=7.5 Hz，α-CH2），
1.93（2H，p，J=7.5 Hz，β-CH₂），1.18（3H，t，J=6.8 Hz，14-CH₃）；¹³C-NMR（100 MHz，CDCl₃）δ_C：180.9（C-1），34.6（C-2），32.4（C-3），30.2（C-4），30.1（C-5，6，7），29.9（C-8），29.8（C-9），29.7（C-10），29.5（C-11），25.1（C-12），23.2（C-13），14.6（C-14）。经与文献^[19]核对，数据基本相同，化合物8为十四烷酸。

化合物9白色无定形粉末，分子式：C₃₅H₆₀O₆，Mr：576.44；¹H-NMR（400 MHz，C₅H₅N）δ_H：5.38（1H，m，H-6），5.09（1H，d，J=7.7 Hz，anomeric H），4.01~4.60（5H，m，sugar），1.01（3H，dd，J=5.9，2.7 Hz，CH₃- 19），0.96（3H，s，CH₃-21），0.91（3H，t，J=1.8 Hz，CH₃-26），0.90（3H，d，J=1.4 Hz，CH₃-29），0.85（3H，m，CH₃-27），0.69（3H，d，J=6.5 Hz，CH₃-18）；¹³C-NMR（100 MHz，C₅H₅N）δ_C：141.5（C-5），122.5（C-6），
103.2（C-1'），79.2（C-5'），79.1（C-3'），78.7（C-3），75.9（C-2'），72.3（C-4'），63.4（C-6'），57.4（C-14），56.9（C-17），50.9（C-9），46.6（C-24），43.1（C-13），40.6（C-4），39.9（C-12），38.1（C-10），37.5（C-1），37.0（C-20），34.8（C-22），32.8（C-7），32.7（C-8），30.9（C-2），30.1（C- 25），27.0（C-16），25.1（C-23），24.0（C-15），23.7（C-28），21.9（C-11），20.6（C-26），20.0（C-19），19.8（C-21），19.6（C-27），12.7（C-29），12.6（C-18）。经与文献^[20]核对，数据基本相同，化合物9为胡萝卜苷。

化合物10 黄色物质，分子式：C₁₅H₂₃OS，Mr：251.15；¹H-NMR（400 MHz，CDCl₃）δ_H：7.32（2H，s，H-3，5），4.56（2H，s，H-9），3.69（3H，s，10-NCH₃），3.48（3H，s，11-NCH₃），1.72（3H，s，H-8）；¹³C-NMR（100 MHz，CDCl₃）δ_C：197.2（C=S），153.1（C-1），135.9（C-2，6），126.2（C-3，5），125.6（C-4），44.9（10-NCH3），43.3（C-9），41.2（11-NCH₃），34.1（C-7），30.1（C-8）。经与文献^[21]核对，数据基本相同，化合物10为compound VI。

化合物11淡黄色固体，分子式：C₈H₁₆O₆，Mr：208.09；¹H-NMR（400 MHz，CD₃OD）δ_H：4.27（1H，d，J=7.8 Hz，H-1），3.96（1H，dq，J=9.5，7.1 Hz，H-1'b），3.86（1H，dd，J=11.9，1.9 Hz，H-6b），3.67（1H，m，H-6a），3.61（1H，dt，J=9.5，7.1 Hz，H-1'a），3.32（1H，d，J=9.4 Hz，H-3），3.28（2H，m，H-4，5），3.17（1H，dd，J=9.1，7.8 Hz，H-2），1.23（3H，t，J=7.1 Hz，H-2'）；¹³C-NMR（100 MHz，CD₃OD）δ_C：104.2（C-1），78.2（C-5），78.0（C-3），75.2（C-2），71.8（C-4），66.4（C-1'），62.9（C-6），15.7（C-2'）。经与文献^[22]核对，数据基本相同，化合物11为乙基-β-D-糖苷。

化合物12棕色无定形固体，分子式：C₁₉H₂₆O₁₂，Mr：448.42；¹H-NMR（400 MHz，CD₃OD）δ_H：7.43（1H，d，J=1.5 Hz，H-3），5.91（1H， d，J=2.3 Hz，H-1），4.63（1H，d，J=7.9 Hz，H-1'），4.32（1H，dt，J=4.8，2.2 Hz，H-6），3.89（1H，dd，J=12.0，2.2 Hz，H-6'b），3.71（3H，s，OCH₃），3.66（1H，dd，J=12.1，6.1 Hz，H-6'a），3.33（2H，d，J=5.1 Hz，H-3'，5'），3.25（1H，dd，J=9.6，8.7 Hz，H-4'），3.16（1H，dd， J=9.1，7.9 Hz，H-2'），3.06（1H，dq，J=8.9，1.7 Hz，H-5），2.99（1H，dd，J=8.9，2.4 Hz，H-9），2.19（1H，dt，J=14.7，2.0 Hz，H-7b），2.03（1H，d，J=5.3 Hz，H-7a），2.00（3H，s，OCOCH₃），1.50（3H，s，H-10）；¹³C-NMR（100 MHz，CD₃OD）δ_C：173.6（OCOCH₃），169.4（C-11），154.1（C-3），110.2（C-4），100.8（C-1'），96.1（C-1），90.2（C-8），78.7（C-5'），78.4（C-3'），76.4（C-6），75.1（C-2'），72.0（C-4'），63.4（C-6'），52.2（OCH₃），50.4（C-9），48.1（C-7），42.7（C-5），22.6（OCOCH₃），22.6（C-10）。经与文献^[23]核对，数据基本相同，化合物12为6，9-epi-8-O-acetyl shanziside methyl ester。

化合物13白色粉末，分子式：C₁₇H₂₆O₁₁，Mr：406.38；¹H-NMR（400 MHz，CD₃OD）δ_H：7.39（1H，d，J=1.5 Hz，H-3），5.56（1H，d，J=2.7 Hz，H-1），4.61（1H，d，J=7.9 Hz，H-1'），4.03（1H，td，J=6.2，3.5 Hz，H-6），3.88（1H，dd，J=11.9，2.1 Hz，H-6'a），3.72（3H，s，OCH₃），3.63（1H，dd，J=11.9，6.1 Hz，H-6'b），3.36（1H，d，J=8.8 Hz，H-3'），3.32（1H，s，H-5'），3.25（1H，m，H-4'），3.16（1H，dd，J=9.2，7.9 Hz，H-2'），3.00（1H，m，H-5），2.60（1H，dd，J=10.2，2.6 Hz，H-9），2.00（1H，dd，J=13.2，6.4 Hz，H-7a），1.81（1H，dd，J=13.2，6.0 Hz，H-7b），1.24（3H，s，H-10）；¹³C-NMR（100 MHz，CD₃OD）δ_C：169.5（C- 11），152.6（C-3），111.2（C-4），99.6（C-1'），94.6（C-1），78.8（C-8），78.1（C-3'），77.7（C-5'），77.2（C-6），74.4（C-2'），71.4（C-4'），62.6（C-6'），51.7（OCH₃），51.5（C-9），49.4（C-7），41.2（C-5），24.5（C- 10）。经与文献^[24]核对，数据基本相同，化合物13为山栀苷甲酯。

化合物14白色无定形固体，分子式：C₁₇H₂₆O₁₃，Mr：438.14；¹H-NMR（400 MHz，CD₃OD）δ_H：7.43（1H，s，H-3），5.80（1H，s，H-1），4.58（1H，d，J=7.9 Hz，H-1'），4.13（1H，d，J=4.5 Hz，H-6），3.87（1H，d，J=11.9 Hz，H-6'a），3.70（3H，s，OCH₃），3.67（1H，m，H-6'b），3.64（1H，d，J=4.3 Hz，H-7），3.39~3.28（3H，m，H-3'，4'，5'），3.16（1H，t，J=8.5 Hz，H-2'），2.48（1H，s，H-9），1.36（3H，s，H-10）：¹³C-NMR（100 MHz，
CD₃OD）δ_C：169.7（C-11）154.8（C-3），115.1（C-4），99.9（C-1'），94.4（C-1），81.1（C- 7），79.2（C- 5'），79.0（C-8）78.1（C-3'），78.0（C-6），75.0（C-2'），72.1（C-4'），70.7（C- 5），63.2（C-6'），57.6（C-9），52.5（OCH₃），22.7（C-10）。经与文献^[25]核对，数据基本相同，化合物14为5，9-epi-phlomiol。

化合物15白色无定形固体，分子式：C₁₇H₂₆O₁₃，Mr：438.14；¹H-NMR（400 MHz，CD₃OD）δ_H：7.47（1H，s，H-3），5.82（1H，s，H-1），4.56（1H，d，J=7.9 Hz，H-1'），4.00（1H，d，J=9.7 Hz，H-7），3.86（1H，d，J=12.0，2.1 Hz，H-6'a），3.72（1H，s，H-6），3.70（3H，s，OCH₃），3.63（1H，dd，J=12.0，5.9 Hz，H-6'b），3.35（1H，d，J=8.8 Hz，H-5），3.30（1H，m，H-3'），3.23（1H，m，H-4'），3.15（1H，t， J=9.2，7.9 Hz，H-2'），2.48（1H，s，H-9），1.08（3H，s，H-10）；¹³C-NMR（100 MHz，CD₃OD）δ_C：168.5（C-11），154.2（C- 3），115.0（C-4），100.1（C-1'），93.4（C-1），81.0（C-7），78.8（C-8），77.7（C-5'），74.9（C-6），74.7（C-3'），73.5（C-2'），72.0（C-4'），66.5（C-5），63.2（C-6'），58.7（C-9），52.4（OCH₃），18.9（C-10）。经与文献^[26]核对，数据基本相同，化合物15为phlomiol。

化合物16淡黄色无定形固体，分子式：C₁₇H₂₆O₁₁，Mr：406.15；¹H-NMR（400 MHz，CD₃OD）δ_H：7.50（1H，s，H-3），5.76（1H，s，H-1），4.51（1H，d，J=7.9 Hz，H-1'），4.23（1H，t，J= 4.5 Hz，H-6），3.85（1H，d，J=12.0，2.2 Hz，H-6'a），3.67（3H，s，OCH₃），3.59（1H，dd，J=12.0，6.3 Hz，H-6'b），3.33（1H，d，J=8.9 Hz，H-3'），3.28（1H，m，H-5'），3.21（1H，d，J=9.0 Hz，H-4'），3.13（1H，dd，J=9.3，7.9 Hz，H-2'），2.60~2.48（2H，m，H-8，9），1.75（1H，ddd，J=13.3，7.2，4.3 Hz，H-7a），1.40（1H，ddd，J=13.2，6.9，4.7 Hz，H-7b），0.88（1H，d，J=6.8 Hz，H-10）；¹³C-NMR（100 MHz，CD₃OD）δ_C：168.4（C-11），155.6（C-3），113.6（C-4），100.0（C-1'），96.0（C-1），78.6（C-5'），77.5（C-3'），76.9（C-6），74.5（C-2'），73.7（C-5），71.8（C-4'），63.0（C-6'），52.0（OCH₃），50.6（C-9），40.8（C-7），31.7（C-8），16.8（C-10）。经
与文献^[25]核对，数据基本相同，化合物16为5,9-epi-penstemoside。

化合物17黄色晶性物质，分子式：C₁₆H₁₄O₅，Mr：286.09；¹H-NMR（400 MHz，CD₃OD）δ_H：7.12（1H，d，J=8.2 Hz，H-5），
6.64（1H，s，H-5'），6.53（1H，s，H-2'），6.40（1H，dd，J=8.2，2.4 Hz，H-6），6.22（1H，d，J=2.2 Hz，H-8），3.89（1H，m，H-4），3.85（1H，s，H-2a），3.62（1H，d，J=11.3 Hz，H-2b），2.95（1H，d，J=15.6 Hz，H-9a），2.70（1H，d，J=15.6 Hz，H-9b）；¹³C-NMR（100 MHz，CD₃OD）δ_C：158.1（C-7），155.9（C-8a），145.9（C-3'），145.5（C-4'），137.6（C-6'），132.5（C-5），131.5（C-1'），115.7（C-4a），113.0（C-2'），112.6（C-5'），110.1（C-6），104.4（C-8），78.3（C-3），71.0（C-2），51.2（C-4），43.1（C-9）。经与文献^[27]核对，数据基本相同，化合物17为brazilin。

化合物18黄色固体，分子式：C₂₆H₃₄O₁₁，Mr：522.21；¹H-NMR（400 MHz，CD₃OD）δ_H：7.07（2H，s，H-2，2'），6.84（1H，d，J=1.9 Hz，H-6），6.72（1H，d，J=1.9 Hz，H-5），6.66（1H，d，J=8.1 Hz，H-5'），6.62（1H，d，J=8.0 Hz，H-6'），4.75（1H，d，J=6.7 Hz，H-7），4.21（1H，d，J=7.7 Hz，H-1"），3.96（1H，m，H-9a），3.90（1H，m，H-9'a），3.79（1H，m，H-6"a），3.76（3H，s，3-OCH₃），3.74（3H，s，3'-OCH₃），3.68（1H，d，J=7.3 Hz，H-9'b），3.65（1H，m，H-6"b），3.58（1H，dd，J=11.8，5.1 Hz，H-9b），3.14（1H，m，H-7'a），2.86（1H，dd，J=13.4，4.8 Hz，H-8'），2.68（1H，dt，J=11.8，6.1 Hz，H-7'b），2.42（1H，m，H-8）；¹³C-NMR（100 MHz，CD₃OD）δ_C：149.6（C-3， 3'），147.6（C-4），146.4（C-4'），136.2（C-1），134.3（C-1'），122.9（C-6'），120.4（C-6），116.7（C-5'），116.6（C-5），114.0（C-2'），111.3（C-2），105.4（C-1"），84.8（C-7），78.7（C-5"），78.6（C-3"），75.8（C-2"），74.2（C-9'），72.2（C-4"），69.1（C-9），63.3（C-6"），57.0（3-OCH₃），57.0（3'-OCH₃），52.4（C-8），44.6（C-8'），34.5（C-7'）。经与文献^[28]核对，数据基本相同，化合物18为lariciresinol-9-O-β-D-glucopyranoside。化合物1~18的化学结构见图1。

• 
  图1 化合物1~18的化学结构

  Figure 1.The chemical structures of compounds 1-18

  

2.3 CCK-8法测定体外抗肿瘤细胞活性

选取人肝癌细胞（HepG2）和人结直肠腺癌细胞（HCT-15）进行实验。采用二甲基亚砜溶解化合物1~2、4~7、12~16，配制浓度为40  μmol/ L的母液；再用DMEM培养基按比例稀释母液，配制成不同浓度梯度（40、8、1.6、0.32、0.064  μmol/ L）的样品溶液，每个浓度设置3个复孔；选取生长状态良好的细胞接种于96孔板，100 μL/孔，于37℃、5% CO₂、90%湿度条件下培养24  h，待细胞贴壁后弃去培养基，加入PBS清洗3次后，加入200 μL样品溶液，对照组加入200  μL的DMEM培养基，空白组仅加入PBS溶液，继续培养24 h；孵育完成后，弃去原溶液，PBS清洗3次后，每孔加入110 μL 10%的CCK-8溶液，继续培养4  h；采用酶标仪在450  nm处测定吸光度（OD）值，按下式计算细胞抑制率，并通过直线回归方程计算半数抑制浓度（half maximal inhibitory concentration，IC₅₀）：

细胞抑制率（%）=（对照组-给药组）/（对照组-空白组）×100%

采用IBM SPSS Statistics 27软件进行统计分析，数据以表示，进行单因素方差分析（One-way Anova）与t检验（Student's t test），以P＜0.05为差异有统计学意义。

不同化合物分别作用于HepG2细胞和HCT-15细胞48 h后，其抑制率见图2和图3，其IC₅₀见表1。结果表明，化合物1、2、5、15、16对HepG2细胞无显著抑制活性；化合物12、13、15、16对HCT-15细胞亦无明显的抑制效果。其中，化合物14的各浓度均对HCT-15细胞有不同程度的抑制活性，且呈剂量依赖性，化合物14的IC₅₀为（5.86±0.77）μmol/L，具有显著的体外抗肿瘤活性。

• 
  图2 各化合物对HepG2细胞的抑制率（n=3）

  Figure 2.Figur 2. The inhibition rates of various compounds on HepG2 cells (n=3)

  

• 
  图3 各化合物对HCT-15细胞的抑制率（n=3）

  Figure 3.Figur 3. The inhibition rates of various compounds on HCT-15 cells (n=3)

  注：与对照组比较，aP＜0.01。

  

• 
  表格1 化合物抑制肿瘤细胞增殖的IC50（μmol/L，n=3）

  Table 1.The IC50 of various compounds inhibiting the proliferation of tumor cells （μmol/L, n=3）

  

3 讨论

本课题对沧江糙苏95%乙醇水提取物及90%PE-10%CHCl₃混合液提取物的化学成分进行分离纯化，从中分离得到18个化合物：9个环烯醚萜类（1、5、6、7、12、13、14、15、16），2个苯乙醇苷类化合物（2、4），2个黄酮类（3、18），1个木质素（17），1个单糖苷（11），1个甾体醇（9），1个酚类（10），1个脂肪酸（8），化合物10、17、18为该属首次分离，化合物1~18为首次从沧江糙苏中分离。同时对沧江糙苏中11个环烯醚萜类、苯乙醇苷类化合物进行CCK8法抗肿瘤细胞活性测试，结果表明化合物14~16对HCT-15细胞有一定的体外抑制活性，随着药物浓度增加，抑制率增大，其中化合物14的IC₅₀为（5.86 ±0.77）μmol/L，小于40  μmol/L，有一定的体外抑制活性，对HCT-15具有明显的抑制效果，有望作为潜力化合物进行研究，进一步分析化合物14的抗肿瘤活性，推测可能与环烯醚萜母核结构变化有关，下一步将以此作为基础继续探究。本研究针对沧江糙苏进行化学成分鉴定和生物活性考察，增加了糙苏属植物种类研究的丰富性，希望针对糙苏植物后续研究提供一定的参考，进而促进糙苏药用资源的开发和利用。

利益冲突：所有作者均声明不存在利益冲突。

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