目的  建立有区分能力的奥利司他胶囊溶出度检测法，评价国内6家企业与进口奥利司他胶囊溶出曲线的相似性。

方法  采用HPLC法，色谱柱为Thermo Hyersil GOLD C₁₈（150 mm×4.6 mm，5 μm）^{_{柱，流动相为乙腈-水（85 ∶ 15），流速为1.0 mL·min-1，检测波长为195 nm，柱温为30℃，进样量为20 μL。考察不同浓度十二烷基硫酸钠、不同浓度氯化钠及不同pH溶出介质对溶出曲线的影响，筛选出最佳溶出条件，并采用溶出曲线相似因子法评价溶出曲线的相似性。}}

结果  奥利司他在5.989~179.697 μg·mL^-1范围内线性关系良好（r=0.999 8），平均回收率为100.4%，RSD为1.1%（n=9）。筛选出的最佳溶出条件如下：以含1.0%十二烷基硫酸钠、0.5%氯化钠、pH 6.0的磷酸盐缓冲溶液为溶出介质，在桨法、75 r·min^-1、介质1 000 mL的条件下开展溶出试验。 国内仅1 家企业产品与参比制剂的溶出曲线相似，其余5家企业产品与参比制剂相比溶出行为均不一致。

结论  该法能有效区分不同企业生产的奥利司他胶囊的溶出行为，对我国开展奥利司他胶囊仿制药质量与疗效一致性评价具有一定的参考意义。

奥利司他为戊酸十二烷酯类化合物，系胃肠道脂肪酶抑制剂，口服后几乎不被胃肠道吸收，大部分集中在胃肠壁，通过与胃和小肠腔内的胃脂肪酶和胰脂酶的活性部位丝氨酸形成共价键使酶失活，阻断食物中脂肪酶吸收而产生减肥作用 [1-2]。奥利司他胶囊在中国药典2020年版二部、英国药典2020版、日本药典第18版、欧洲药典第10版均未收载，120 mg规格的本品在美国药典第43版以及国内各企业的标准中所列溶出度方法均以3.0%十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate, SDS）溶液、0.5% 氯化钠溶液、pH 6.0的磷酸盐缓冲溶液为溶出介质，浆法75 r·min^-1，45 min取样，用HPLC法检测溶出量，限度为75%，仅溶出体积有差异。奥利司他属生物药剂学系统分类4类：低溶解度-低渗透性药物，药物在体内溶出速率的快慢和溶出量对疗效的影响至关重要。

根据国家药品监督管理局仿制药质量一致性评价-溶出试验指导原则，通过试验发现本品在pH 1.2盐酸溶液、pH 4.0醋酸缓冲液、pH 6.8磷酸盐缓冲液和水4种溶出介质中120 min溶出量小于10%，而在高浓度SDS溶液条件下，各企业之间溶出度行为差异不明显。本研究以原研药物作为参比制剂，摸索出适宜浓度的SDS溶液，用以评价国内6家制剂产品与原研药物溶出曲线的相似性；并在文献[3-13]基础上，以产品的处方工艺为主线，研究了对不同处方工艺有区分力的溶出度检查方法，区分不同工艺产品质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

RT612-AT型自动取样溶出仪（深圳市锐拓仪器设备有限公司）；XP205型电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多）；LC-20AD型高效液相色谱仪，包括SPD-20A紫外检测器和CTO-10AS vp柱温箱（日本岛津）；Prima PM6-2700TD超声仪。

1.2 试药

奥利司他对照品（中国食品药品检定研究院，批号：520027-202102，纯度99.5%）；SDS、氯化钠和磷酸均为分析纯；试验样品规格均为120 mg/粒，其余信息见表1。

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  表格1 样品信息

  Table 1.Sample information

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2 方法与结果

2.1 HPLC方法学考察

2.1.1 色谱条件

色谱柱为Thermo Hyersil GOLD C₁₈（150 mm× 4.6 mm，5 μm）柱，流动相为乙腈-水（85 ∶ 15），流速为1.0 mL·min^-1，检测波长为195 nm，柱温为30℃，进样量为20 μL。

2.1.2 溶液的配制

供试品溶液：取1粒胶囊，加1.0% SDS溶液超声（功率600 W，频率40 kHz）溶解制成储备液，滤过，精密量取续滤液1 mL置10 mL量瓶，加1.0% SDS溶液稀释至刻度，摇匀，即得。

阴性样品溶液：取1粒空白胶囊壳，按处方取各辅料适量，并按供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。

标准曲线溶液：精密称取奥利司他对照品12.04 mg，置20 mL量瓶中，用50%乙腈稀释至刻度，摇匀，即得奥利司他对照品储备液；精密量取奥利司他对照品储备液适量，分别用50%乙腈稀释成5.989，11.979，23.959，59.899，95.838，119.798，149.747，179.697 μg·mL^-1系列浓度的标准曲线溶液。

2.1.3 系统适用性试验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进样分析，记录色谱图（图1），阴性样品不干扰奥利司他主成分的检测。

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  图1 HPLC色谱图

  Figure 1.HPLC chromatogram

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2.1.4 线性关系考察

精密吸取“2.1.2”项下系列标准曲线溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进样分析，以溶液浓度（X，μg·mL^-1）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，计算得线性回归方程为Y=13 901X+32 288，r=0.999 8，结果表明奥利司他在5.989~179.697 μg·mL^-1范围内线性关系良好。

2.1.5 回收率试验

精密量取“2.1.2”项下奥利司他对照品贮备液2，4，6 mL分别置于20 mL量瓶中，各加入空白辅料贮备液续滤液2 mL，用1.0% SDS溶液稀释至刻度，摇匀，即得50%，100%，150% 3个不同水平的回收率供试品溶液，每个水平平行配制3份，按“2.1.1”项下色谱条件进样分析，计算得奥利司他的平均回收率为100.4%，RSD为1.1%（n=9）。

2.2 溶出条件的筛选

2.2.1 溶出介质中不同浓度SDS的考察

选取奥利司他胶囊参比制剂为样品，分别以含SDS 0.5%，0.8%，1.0%，1.5%，2.0%，2.5%，3.0%的磷酸盐缓冲溶液（0.5%氯化钠、pH 6.0）1 000 mL为溶出介质，采用浆法，在转速75 r·min^-1、37℃的条件下于5，10，15，20，25，30，35，40，45，60，90，120 min分别取样5 mL（同时补充等温、等体积介质），经0.45 μm滤膜过滤，取续滤液按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，计算奥利司他的累计溶出率，并绘制溶出曲线（图2）。结果表明，SDS溶液浓度在1.0%及以上时，奥利司他在45 min的累积溶出量均可达80%，故选择1.0% SDS溶液开展试验。

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  图2 含不同浓度SDS溶出介质的累积溶出曲线（n=6）

  Figure 2.Cumulative dissolution curve of dissolution media with different concentrations of SDS (n=6)

  

2.2.2 不同pH溶出介质的考察

选取奥利司他胶囊参比制剂为样品，分别以pH 5.0，6.0，7.0，8.0，9.0的磷酸盐缓冲溶液（含0.5%氯化钠、1.0% SDS）1 000 mL为溶出介质，其余溶出条件、取样时间点及测定方法同“2.2.1”项，绘制的溶出曲线见图3。结果表明，pH对奥利司他的溶出基本无影响，故选择现行标准中pH 6.0开展试验。

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  图3 不同pH溶出介质的累积溶出曲线（n=6）

  Figure 3.Cumulative dissolution curve of dissolution media with different pH (n=6)

  

2.2.3 溶出介质中不同浓度氯化钠的考察

选取B企业20191005A批次样品，分别以含氯化钠0.1%，0.25%，0.4%，0.5%，0.6%，0.75%的磷酸盐缓冲溶液（1.0% SDS、pH 6.0）1 000 mL为溶出介质，其余溶出条件和测定方法同“2.2.1”项，于10，20，30，45，60，90，120 min测定累积溶出度，绘制的溶出曲线见图4。结果表明氯化钠浓度由0.1%增至0.75%时，介质的溶出能力增强，由于奥利司他在0.5%~0.75%氯化钠浓度介质中的溶出能力差别不大，故选择现行标准中使用的0.5%氯化钠开展试验。

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  图4 含不同浓度氯化钠溶出介质的累积溶出曲线（n=6）

  Figure 4.Cumulative dissolution curve of dissolution media with different concentrations of sodium chloride (n=6)

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2.3 不同企业溶出曲线测定与参比制剂溶出曲线相似因子测定

以含1.0% SDS、0.5%氯化钠、pH 6.0的磷酸盐缓冲溶液为溶出介质，在桨法、75 r·min^-1、介质1 000 mL的条件下开展溶出试验，分别于10，20，30，45，60 min取样，对6家企业奥利司他胶囊的累积溶出度进行测定，并绘制溶出曲线（图5），计算与参比制剂的溶出曲线相似因子（表2）。结果仅B企业的溶出曲线相似因子大于50。

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  图5 参比制剂与不同企业奥利司他胶囊的累积溶出曲线（n=6）

  Figure 5.Cumulative dissolution curve of reference preparation and orlistat capsules from different enterprises（n=6）

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  表格2 参比制剂与不同企业奥利司他胶囊在45 min和120 min的累积溶出曲线及溶出曲线相似因子

  Table 2.Cumulative dissolution curve and f2 factor of the reference preparations and different enterprise orlistat capsules at 45 and 120 min

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3 讨论

通过HPLC法色谱条件的摸索，流动相乙腈-水比例为85 ∶ 15、流速为1.0 mL·min^-1、检测波长为195 nm、进样量为20 μL，能避开6家企业辅料对主成分检测的干扰 ；采用以1.0% SDS、0.5%氯化钠、pH 6.0的磷酸盐缓冲液1 000 mL为溶出介质，转速75 r·min^-1的溶出条件开展累计溶出试验，能有效区分6家企业的奥利司他胶囊与原研产品的溶出行为。

因本品在生物药剂学上分类为4类，SDS的浓度为影响制剂溶出速率和溶出总量的主要因素；溶出介质pH在5.0~9.0对溶出速率基本无影响；随氯化钠浓度的增加，介质的溶出能力增加；溶出度检测方法方法学表明，该检测方法专属性、线性、回收率均良好。

仅B企业与原研企业的溶出行为基本相似，A、C、D、E、F与原研企业的溶出行为差异明显，表明其处方组成与制备工艺有待进一步改进与提高。本方法的建立，对我国进行奥利司他胶囊仿制药质量与疗效一致性评价具有一定的参考意义。

本研究仅对奥利司他胶囊的体外溶出行为开展研究，且使用较高浓度的SDS，体内外溶出的行为可能产生差异，后续还应通过人体生物等效性试验验证本品与参比制剂疗效的一致性。

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