目的  优选出朝鲜淫羊藿煮散剂的最佳粉碎粒度及煎煮工艺。

方法  采用HPLC法与紫外-可见分光光度法对加水量、浸泡时间及煎煮时间3个因素进行考察，以总黄酮、淫羊藿苷、干膏率为样品的考察指标，运用层次分析法-熵权法进行综合评分，优选出朝鲜淫羊藿煮散剂的最佳粉碎粒度，同时结合Box-Behnken响应面法优选出朝鲜淫羊藿煮散剂的煎煮工艺。

结果  朝鲜淫羊藿煮散剂的最佳制备工艺为：将其粉碎至过4~5目筛，随后加入12倍量的水，浸泡15 min后，煎煮40 min。

结论  本研究优选的朝鲜淫羊藿煮散剂粒度科学合理，所确定的煎煮工艺简便可行，整体契合实际生产需求，利于工业化应用。

朝鲜淫羊藿（Epimedium koreanum Nakai.）具有补肾阳、强筋骨、祛风湿等功效。其化学成分复杂多样，其中黄酮类化合物为主要生物活性成分，此外还包含木脂素类、甾体类等成分[1]。现代药理学研究表明，淫羊藿苷具有调节免疫功能、促进骨形成、保护心脑血管等作用；淫羊藿提取物亦表现出抑菌、抗炎、抗病毒活性，并可用于哮喘的辅助治疗[2-4]。

中药煮散是一种将中药材或饮片粉碎至特定粒度后，加水煎煮，去渣取汁所制成的液体制剂 [5-6]。与传统汤剂相比，煮散既保留了易吸收、起效快的特点，又具备节省药材、提高煎出率、降低生产成本等优势[7-9]。

本研究以朝鲜淫羊藿传统饮片为原料，将其依次粉碎并过筛，制备出4~5、5~10、10~24、24~50、50~65目共5种不同粒度的煮散粉末样品。以干膏率、淫羊藿苷含量和总黄酮含量为评价指标，采用层次分析法-熵权法（analytic hierarchy process-entropy weight method，AHP-EWM）[10]进行综合评分，优选最佳粉碎粒度；进一步运用Box-Behnken响应面法[11]优化煎煮工艺，并对工艺条件进行验证，以期为中药煮散剂的后续研究与开发提供参考依据。

1 材料

1.1 主要仪器

Agilent 1260高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；723PC型紫外-可见分光光度计（上海叶拓科学仪器有限公司）；BSM-220.3型电子天平（上海卓精电子科技有限公司）；LC-HRB-100型电热鼓风干燥箱（上海力辰邦西仪器科技有限公司）；KQ-500DE超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；EC35T8-微电脑商用电陶炉（逸臣集团有限公司）；1000A型多功能粉碎机（深圳艾尔莎科技有限公司）。

1.2 主要药品与试剂

朝鲜淫羊藿饮片（产地：吉林省通化市，批 号：309001）购自吉林敖东延边药业股份有限公司，经长春中医药大学肖井雷教授鉴定为小檗科植物朝鲜淫羊藿的干燥叶；淫羊藿苷（中国食品药品检定研究院，批号：2024003，纯度99.9%）；乙腈和甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为娃哈哈纯净水。

2 方法与结果

2.1 朝鲜淫羊藿煮散剂的制备

2.1.1 不同粒度煮散饮片的制备

将净选后的朝鲜淫羊藿传统饮片粉碎，并过筛制备成4~5、5~10、10~24、24~50、50~65目5 种不同粒度的样品，备用[12-13]。

2.1.2 煮散剂的制备

分别称取5种不同粒度的煮散粉末及朝鲜淫羊藿饮片样品各20 g，加入12倍量水，浸泡30 min。先以武火煮沸，再改用文火继续煎煮30  min。煎煮结束后滤取药液，待冷却后转移至60℃烘箱中干燥至恒重。

2.2 干膏得率的测定

精密量取“2.1.2”项下所得煎煮液25 mL，置于已恒重的蒸发皿中，于水浴上蒸干，再于105℃烘箱中干燥至恒重。取出后置于干燥器中冷却至室温，精密称定质量，据此计算5种不同粒度煮散剂及朝鲜淫羊藿饮片样品的干膏得率，结果见表1。

2.3 淫羊藿苷含量的测定

2.3.1 色谱条件

色谱柱：ODS-3 C₁₈柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（0~30 min，24%→26% A；30~31 min，26%→45% A；31~45 min，45%→47% A）；检测波长：270 nm；柱温：30℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL[14]。

2.3.2 对照品溶液的制备

精密称取淫羊藿苷对照品 4.58 mg，加甲醇溶解并定容，制成每1 mL含22.92 μg的溶液。

2.3.3 供试品溶液的制备

精密称取“2.1.2”项下所得的干膏0.25 g，置50 mL锥形瓶中，加入75%乙醇50 mL，称定重量，超声处理（功率：200 W，频率：50 kHz）45 min，取出，放冷，再次称重，用75%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液经0.22  μm 微孔滤膜过滤，即得朝鲜淫羊藿5种不同粒度的供试品溶液。

2.3.4 测定方法

在上述色谱条件下，淫羊藿苷的线性范围为0.012 5~0.200 0 mg/mL，平均回收率为101.64%，RSD为0.98%（n=6），精密度、重复性、稳定性均符合要求。依次精密注入空白溶液（75%乙醇）、对照品溶液与供试品溶液各10 μL，记录色谱图（图1），测定淫羊藿苷峰的峰面积。采用外标法，计算样品中淫羊藿苷的含量，结果见表1。

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  图1 HPLC色谱图

  Figure 1.HPLC chromatogram

  注：A. 空白溶液；B. 对照品溶液；C. 供试品溶液（4~5目煮散粉 末）；1. 淫羊藿苷。

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2.4 总黄酮含量的测定

精密称取淫羊藿苷对照品0.221 4 g，加稀乙醇溶解并定容，制成浓度为0.110 7 g/mL的对照品溶液。另精密称取“2.1.2”项下干膏粉约0.13 g，置50 mL具塞锥形瓶中，加入稀乙醇50 mL，称定重量，超声处理（功率：200 W，频率：50 kHz）30 min，取出放冷，再次称重，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 mL，置50 mL量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。以稀乙醇为空白，于270 nm波长处测定吸光度。总黄酮的线性范围为0.002 2~0.006 4 mg/mL，平均回收率为101.33%，RSD为0.18%（n=6），精密度、重复性、稳定性均符合要求。采用标准曲线法，计算样品中总黄酮的含量，结果见表1。

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  表格1 朝鲜淫羊藿不同粒度的煮散剂成分含量及干膏得率测定结果

  Table 1.Determination results of component content and dry extract rate in Epimedium koreanum Nakai. boiled powder with different particle sizes

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2.5 权重计算

2.5.1 AHP计算权重

AHP是一种将定性问题转化为定量评价的主观赋权方法[15-16]。本研究以朝鲜淫羊藿饮片及其5种不同粒度煮散粉末的淫羊藿苷含量、干膏率和总黄酮含量作为评价指标，根据各指标影响的显著程度进行量化，采用一致矩阵法构建判断优先矩阵（表2）。随后，运用和积法计算得出总黄酮、干膏率与淫羊藿苷的权重系数分别为0.375  0、0.500  0和0.125 0。经一致性检验，一致性比率（consistency ratio，CR）为0（小于0.1的临界值），表明判断矩阵具有满意的一致性，所计算得的权重系数有效。最终确定各指标的重要性顺序为：干膏率＞总黄酮含量＞淫羊藿苷含量。

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  表格2 3种评价指标成对比较优先判断矩阵

  Table 2.Pairwise comparison priority judgment matrix of three evaluation indicators

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2.5.2 EWM计算权重

EWM是一种基于指标离散程度进行评价的客观赋权法[11]。该方法通过信息熵值判断指标的离散程度，熵值越大，离散程度越小，因此可以利用信息熵计算权重，对指标进行评价[17]。具体计算步骤如下：首先对原始数据进行预处理，对于正向指标按公式（1）进行处理；之后按公式（2） 进行数据平移；再根据公式（3）完成标准化处理；随后依据公式（4）计算各指标的信息熵值；最后按公式（5）计算各指标的客观权重。经熵权法计算，得到干膏率（%）的权重为0.516  8，总黄酮含量（mg/g）的权重为0.242  8，淫羊藿苷含量（mg/g）的权重为0.240 4。

式中，X_ij为第i个样品中第j个指标的取值， X_min、X_max分别表示第i个样品中最小值和最大值，P_ij为第i个样品第j个指标所占的比例，E_j为样品中第j个指标的信息熵值，W_j为样品中第j个指标的权重系数值，m为被评对象的数目，n为指标个数。

2.5.3 复合权重

将AHP与EWM相结合，设定由AHP得到的主观权重为W_a，由EWM得到的客观权重为W_b，复合权重为W_c。根据公式（6）计算，得到总黄酮、干膏得率与淫羊藿苷含量的复合权重系数分别为 0.240 0、0.680 9和0.079 1。

2.6 煮散饮片最佳粒度确定

基于复合权重对不同粒度的煮散剂进行综合评分，结果见表3。由结果可知，过4~5目筛的朝鲜淫羊藿煮散粉末综合评分最高，表明其为本研究中的最佳粉碎粒度。

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  表格3 朝鲜淫羊藿不同粒度的煮散剂的综合评分（分）

  Table 3.Comprehensive evaluation of boiled powder of different particle sizes of Epimedium koreanum Nakai. (points)

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2.7 煎煮工艺研究

2.7.1 单因素试验

①加水量考察。称取朝鲜淫羊藿煮散饮片20 g，分别加入8、10、12、14、16倍量的水，浸泡30 min后煎煮30 min；制备淫羊藿苷与总黄酮的供试品溶液，以干膏率、总黄酮含量及淫羊藿苷含量为评价指标进行综合评分，结果见图2。如图所示，当加水量为12倍时，综合评分最高。因此，选择加水量10、12、14倍时3个水平进行后续的响应面优化分析。

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  图2 加水量考察结果（n=3）

  Figure 2.Investigation results of water addition amount（n=3）

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②浸泡时间考察。称取朝鲜淫羊藿煮散饮片20 g，加入12倍量的水，分别浸泡0、15、30、45、60 min后煎煮30 min；制备淫羊藿苷与总黄酮的供试品溶液，以干膏率、总黄酮含量及淫羊藿苷含量为评价指标进行综合评分，结果见图3。如图所示，当浸泡时间为15 min时，综合评分最高。因此，选择浸泡时间0、15、30 min时3个水平进行后续的响应面优化分析。

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  图3 浸泡时间考察结果（n=3）

  Figure 3.Investigation results of soaking time (n=3)

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③煎煮时间考察。称取朝鲜淫羊藿煮散饮片20 g，加入12倍量的水，浸泡45 min后分别煎煮10、20、30、40、50 min；制备淫羊藿苷与总黄酮的供试品溶液，以干膏率、总黄酮含量及淫羊藿苷含量为评价指标进行综合评分，结果见图4。如图所示，当煎煮时间为40 min时，综合评分最高。因此，选择煎煮时间30、40、50 min时3个水平进行后续的响应面优化分析。

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  图4 煎煮时间考察结果（n=3）

  Figure 4.Investigation results of decoction time (n=3)

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2.7.2 Box-Behnken响应面法优化煎煮工艺

在单因素试验结果的基础上，选取加水量（A）、浸泡时间（B）与煎煮时间（C）作为关键考察因素。应用Design-Expert 13软件，采用 Box-Behnken设计原理，建立三因素三水平的响应面分析模型。各因素的水平设置见表4。

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  表格4 响应面试验因素水平表

  Table 4.Factors and levels table for response surface test

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根据已确定的试验方案进行Box-Behnken试验，采用Design-Expert 13软件对试验结果进行统计分析。各试验因素与响应值结果见表5，回归模型的方差分析结果见表6。通过软件分析，得到煎煮工艺综合评价指标（Y）与加水量（A）、浸泡时间（B）和煎煮时间（C）的二次回归方程如下：Y=96.07+1.61A+3.52B+1.57C-0.040 5AB+ 0.153  4AC+0.040 3BC-10.29A²-11.85B²-11.24C²。

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  表格5 响应面试验设计及结果

  Table 5.Design and results of response surface test

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  表格6 响应面试验方差分析结果

  Table 6.Results of analysis of variance of response surface test

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根据方差分析结果可知，该模型的P值小于0.000 1，表明所选用的二次回归方程模型具有高度显著性，可靠性强。同时，失拟项的P值为0.843  9（大于0.05），说明模型与试验数据拟合良好，未观测到显著的系统偏差，因此该模型可用于对不同条件下朝鲜淫羊藿煮散煎煮工艺的效果进行分析与预测。

2.8 最佳煎煮工艺条件确定

利用Design-Expert 13软件对朝鲜淫羊藿煮散剂煎煮工艺中各因素的影响进行分析，绘制了因素间交互作用对应的响应面与等高线图（图5）。由图可知，在固定某一因素水平不变时，可直观反映其余两因素交互作用对综合评分的影响。分析表明，各因素对煎煮工艺综合评分的影响主次顺序为：浸泡时间＞加水量＞煎煮时间。

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  图5 朝鲜淫羊藿煮散剂响应面图

  Figure 5.Response surface plot of Epimedium koreanum Nakai. boiled powder

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2.9 最佳煎煮工艺验证

基于所建立的回归方程，采用Design-Expert 13软件进行参数优化，得到理论最佳煎煮工艺为：加水量12.1倍、浸泡时间17.18 min、煎煮时间40.69 min，此时预测综合评分为97.02。结合实际生产中的可行性与操作性，将工艺参数调整为：加水量12倍、浸泡时间18 min、煎煮时间40 min。按此条件进行3批验证试验，测得总黄酮含量为300.1 mg/g，淫羊藿苷含量为39.8 mg/g，干膏率为15.9%，综合评分平均值为96.93。验证结果表明，实际综合评分与预测值接近，误差在合理范围内，说明通过Box-Behnken响应面法优化朝鲜淫羊藿煮散剂煎煮工艺具有较好的可行性与可靠性。

3 讨论

朝鲜淫羊藿是我国最具开发前景的药用植物之一，作为传统补肾壮阳药材，其独特的活性成分与多样的药理作用一直备受关注。为提升其煎出效率与制剂适用性，本研究围绕朝鲜淫羊藿煮散剂的粉碎粒度与煎煮工艺展开系统优化。

在粒度筛选方面，采用AHP-EWM相结合的评价方法，综合主观经验与客观数据，确定过4~5目筛为最佳粉碎粒度。该粒度范围有利于在保持较高溶出效率的同时，避免因过细粉末导致的煎煮液黏度升高与过滤困难。

在工艺优化方面，基于单因素试验确定各参数的合理范围后，进一步采用Box-Behnken响应面法，以总黄酮含量、干膏率及淫羊藿苷含量为综合评价指标，系统分析加水量、浸泡时间与煎煮时间三因素的交互影响。最终确定最佳煎煮工艺为：加水量12倍，浸泡时间18 min，煎煮时间40 min。验证试验结果表明，该工艺稳定可行，综合评分与预测值吻合良好。

目前，中药煮散剂相关研究仍较为有限，本研究不仅为朝鲜淫羊藿煮散剂的开发提供了实验依据与工艺参考，也为该类传统剂型的现代化应用积累了数据。然而，从实验室工艺向产业化生产的过渡仍需进一步开展中试放大试验，以验证工艺的稳健性与大规模生产的可行性。

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